詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
羊膜 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7968 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
人羊膜成纖維分離自胎盤組織,;胎盤(placenta)是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官,由羊膜,、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成,。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤從母體取得營(yíng)養(yǎng),,而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性,。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素,是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官,。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,,胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,,以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換,,這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤,。羊膜是胎盤的最內(nèi)層,,與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,含有眼表上皮細(xì)胞,,包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì),,其光滑,無(wú)血管,、神經(jīng)及淋巴,,具有一定的彈性;在電鏡下,,其分為五層:上皮層,、基底膜、致密層,、纖維母細(xì)胞層和海綿層,,羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,主要為Ⅰ,、Ⅲ,、Ⅳ,、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白,、層粘連蛋白等成份,。羊膜成纖維細(xì)胞主要來(lái)自基底膜、致密層,、纖維母細(xì)胞層,。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的人羊膜成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的人羊膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS,、bFGF,、Insulin、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳3-5代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
人羊膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng),。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(-4)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠骨保護(hù)素(OPG)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠B因子(BF)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human pemphigus foliaceus (PF) ELISA Kit 人落葉型天皰瘡抗體(PF)試劑盒
HumanCompleme1q,C1qELISAKit 人補(bǔ)體1q(C1q)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
DuckIerleukin1,IL-1試劑盒鴨白介素1(IL-1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載體/DNA產(chǎn)物去0酸化處理試劑盒10次
Mousedeoxypyridinoline,DPDELISAKit小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)試劑盒規(guī)格:96T/48T
AlkB同源蛋白8抗體
泛素蛋白連接酶L3抗體
CD48重組人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 Protein
0脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)重組蛋白 Recombinant Glypican 1 (GPC1)
IDI2重組人 IDI2 蛋白 Protein
CLEC4A Protein Human 重組人 CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 蛋白
HA Protein H9N2 重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
0脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)重組蛋白 Recombinant Glypican 1 (GPC1)
CLEC4A Protein Human 重組人 CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 蛋白
CD48重組人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 Protein
HA Protein H9N2 重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
IDI2重組人 IDI2 蛋白 Protein
人羊膜成纖維細(xì)胞大鼠熱休克蛋白β8(HSPβ8)試劑盒 ,,英文名: HSPβ8 ELISA Kit
Mouse vascular endothelial cell growth factor D (VEGF-D) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)試劑盒
RatAquaporin4,AQP-4ELISAKit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforGuineapigImmunoglobulinG,IgGELISAKit豚鼠免疫球蛋白G
細(xì)胞長(zhǎng)鏈脂酰氧化酶(acyl-CoAoxidase)活性比色法定量試劑盒20次
RatTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISAKit大鼠腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性,;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,,漂?。?/p>
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗(yàn),;
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),,淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng),;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。