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產(chǎn)品名稱：人外周血樹突狀細胞(成熟DC細胞)

組織來源：外周血

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：半貼壁半懸浮

細胞形態(tài)：圓形,，樹突狀

傳代特性：屬于高度分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

人外周血樹突狀細胞(成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞簡介：

人外周血DC分離自外周血,，由外周血單核細胞誘導(dǎo)而成的；外周血是除骨髓之外的血液,，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念,。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,，在GM-CSF,、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細胞大而形態(tài)不規(guī)則,，表面皺褶多,，亦可見少量短刺狀突，胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡,，具有較強的遷移能力,，伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細胞，貼壁形態(tài)多樣,。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα,、LPS等誘導(dǎo)而成，多數(shù)呈懸浮生長,， 細胞呈圓形,，細胞體積進一步增大，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞,。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標(biāo)志,，主要通過形態(tài)學(xué),、組合性細胞表面標(biāo)志,、在混合淋巴細胞反應(yīng)中能激活初始T細胞等特征進行鑒定,。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,，進而激活T淋巴細胞,，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，處于啟動,、調(diào)控,、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化,、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,，不能激活T細胞的信號，可導(dǎo)致T細胞無能,，從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86,、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,，一般在30%以下。

方法簡介：

實驗室分離的人外周血成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞,、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導(dǎo)而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的人外周血樹突狀細胞(成熟DC細胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定,、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定,，純度可達80%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一,、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）,、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
公司正在出售的產(chǎn)品：

細胞松弛素B   `1mg

CytochalasinB,Helmihosporiumdematioideum

   50mg

CytochromeC,frombovinehea

小鼠多巴胺(DA)ELISA 試劑盒

Rat visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 大鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)試劑盒

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HumanAquaporin3,AQP-3試劑盒人水通道蛋白3(AQP-3)試劑盒

植物乙酰羧化酶(ACETYL-COACARBOXYLASE)活性比色法定量試劑盒20次

Humahyroxine-BindingGlobulinAssay,TBGELISAKit人甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)試劑盒

棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶GODZ抗體

博萊水解酶抗體

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ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.1mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(1-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(1-39)(抗原)

APOL1重組人 APOL1 / apolipoprotein L1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白

IL2RG Protein Rat 重組大鼠 IL2RG / CD132 蛋白

催乳素誘導(dǎo)蛋白(PIP)重組蛋白 Recombinant Prolactin Induced Protein (PIP)

FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白

PTN重組小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白  Protein

KLRK1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 NKG2D / KLRK1 蛋白 (aa 78-216, His 標(biāo)簽)

CD22重組人 Siglec-2 / CD22 蛋白 (aa 176-687, His 標(biāo)簽) Protein

人外周血樹突狀細胞(成熟DC細胞)大鼠神經(jīng)介素S(NMS)試劑盒 ,，英文名： NMS ELISA Kit

Mouse fibronectin (FN) ELISA Kit 小鼠纖連蛋白(FN)試劑盒

RatneuropeptideY,NP-YELISAKit 大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHBcAb(IgM)乙型肝核心抗體IgM

細胞半胱蛋白酶-2(CASPASE-2)活性比色法定量試劑盒20次

RatVitaminK1,VK1ELISAKit大鼠K1(VK1)試劑盒

收到細胞如何處理？

1,、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有，請拍照,，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3,、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。

4,、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松,。

6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作