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產(chǎn)品名稱：人輸尿管平滑肌細胞

組織來源：尿道

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：長梭形

傳代特性：可傳3-5代左右，3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

人輸尿管平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞簡介：

人輸尿管平滑肌分離自輸尿管組織,；輸尿管上接腎盂,，下連膀胱，是一對細長的管道,，呈扁圓柱狀,，位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu),，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下降進入骨盆,。輸尿管有三個狹窄部：一個在腎盂與輸尿管移行處(輸尿管起始處)；一個在越過小骨盆入口處,；最后一個在進入膀胱壁的內(nèi)部,。這些狹窄是結(jié)石、及壞死組織容易停留的部位,。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結(jié)構(gòu),，即瓦耳代爾鞘，它能有效地防止膀胱內(nèi)尿液返流到輸尿管,。臨床上將輸尿管分為上,、中、下三段,，也可稱為腹段、盆段、膀胱段,。其中,，腹段自腎盂輸尿管交界處，到跨越髂動脈處,；盆段,，自髂動脈到膀胱壁；膀胱段,，自膀胱壁內(nèi)斜行至膀胱粘膜,、輸尿管開口。輸尿管管壁分為4層,，黏膜層,、固有層、肌層,、外膜,。黏膜層表面為移行上皮，約有4-5層細胞,；固有層由細密的結(jié)締組織構(gòu)成,，內(nèi)含膠原纖維和少量彈性纖維；輸尿管肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成,；外膜為疏松結(jié)締組織,，營養(yǎng)血管由外膜進入輸尿管。輸尿管有較厚的平滑肌層,，可作節(jié)律性的蠕動,，使尿液不斷的流入膀胱。因此對輸尿管平滑肌運動的研究,，是尿動力學的重要研究方向,。

方法簡介：

實驗室分離的人輸尿管平滑肌采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的人輸尿管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

收到細胞如何處理,？

1,、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有,，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。

2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3,、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。

4、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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