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產品名稱：人視網膜Muller細胞

組織來源：視網膜組織

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細胞簡介：

人視網膜Muller分離自視網膜組織,；視網膜居于眼球壁的內層，是一層透明的薄膜,。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成,，兩層間在病理情況下可分開,，稱為視網膜脫離,。色素上皮層與脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成,，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞,、遮光、散熱以及再生和修復等作用,。組織學上視網膜分為10層,，由外向內分別為：色素上皮層、視錐,、視桿細胞層,、外界膜、外顆粒層,、外叢狀層,、內顆粒層、內叢狀層,、神經節(jié)細胞層,、神經纖維層、內界膜,。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜,，有感光作用；后部鼻側有一視神經乳頭,。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成,。神經元是視細胞層，專司感光,，它包括錐細胞和桿細胞,。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處最多,。層叫雙節(jié)細胞,，約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經節(jié)細胞相聯(lián)系,，負責聯(lián)絡作用。第三層叫節(jié)細胞層,，專管傳導,。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構，它貼于眼球的后壁部,，傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面,，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū),，其分辨能。視網膜Muller細胞作為視網膜中的主要膠質細胞,，大約占視網膜膠質細胞的90%,，因而在視網膜疾病中起著何種作用也受到越來越多的關注。在超微結構水平上,，Muller細胞的胞質似乎比臨近的其他細胞更高的電子密度,，更發(fā)達的內質網，細胞核是典型的卵圓形或多角形,。但在不同物種中或同一物種中的不同部位,，Muller細胞形態(tài)也會有所差異的。視網膜Muller細胞是一種特化的神經膠質細胞,，不僅具有維持視網膜的正常結構和功能的作用,，并調制視網膜神經元活動，還能參與多種病理過程,，尤其是眼底增殖性病變,，如增生性玻璃體視網膜病變、增生性糖尿病視網膜病變等,，體外培養(yǎng)Muller細胞是研究這些增殖性病變途徑之一,。

方法簡介：

公司實驗室分離的人視網膜Muller采用膠原酶消化法和反復消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

公司實驗室分離的人視網膜Muller經GFAP免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）,、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
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收到細胞如何處理？

1,、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有，請拍照,，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3,、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。

4,、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作