詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
食管 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X8035 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
人食管成纖維分離自食管組織;食管是咽和胃之間的消化管,,食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短,,隨著頸部的伸長(zhǎng)和心肺的下降,而逐漸增長(zhǎng),。食管可分為頸段,、胸段和腹段。脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,,胸段位于左,、右肺之間的縱膈內(nèi),胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連,,腹段很短與胃相連,。在發(fā)育過(guò)程中,食管的上皮細(xì)胞增殖,,由單層變?yōu)閺?fù)層,,食管使管腔變狹窄,甚至一度閉鎖,,以后管腔又重新出現(xiàn),。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層:黏膜層、黏膜下層,、肌層和外膜,。其中,黏膜層,,包括上皮,、固有層和黏膜肌層。食管的外膜,,由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,,富有血管、淋巴管及神經(jīng),。主要包含食管成纖維細(xì)胞,,成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái),。成纖維細(xì)胞較大,,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),,在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,,其中部分開(kāi)始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,,伸展成梭形,,胞核清晰,分布較均勻,,散在生長(zhǎng),,不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,,5-7天即呈融合狀態(tài),,細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),,平坦,、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,,細(xì)胞核較大,,呈橢圓形,顏色淡,。細(xì)胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,,漂?。?/p>
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4,、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),,淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長(zhǎng),;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行,。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的人食管成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的人食管成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基,,含FBS、bFGF,、Insulin,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳3-5代左右,;3代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
人食管成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng),。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠水通道蛋白3(AQP-3)試劑盒 96T/48T
小鼠水通道蛋白2(AQP-2)試劑盒 96T/48T
小鼠水通道蛋白1(AQP-1)試劑盒 96T/48T
小鼠水通道蛋白0(AQP-0)試劑盒 96T/48T
小鼠髓過(guò)氧化物酶(MPO)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat myoglobin (MYO/MB) ELISA Kit 大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)試劑盒
Humanglycophosphatidylinositol,GPIELISAKit 人糖0脂酰肌醇(GPI)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
differeiation40ligand,sCD40L試劑盒兔子可溶性CD40配體(sCD40L)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物I蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MouseEmbryonicStemMESPU30,M30ELISAKit小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)試劑盒規(guī)格:96T/48T
粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體
SHISA7蛋白抗體
CXCL9重組食蟹猴 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白 Protein
M2-PK ( pyruvate Kinase M2 0.5mgM2-PK ( pyruvate Kinase M2) 酸激酶-M2(抗原)
FCGR2A重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 標(biāo)簽) Protein
CKB Protein Human 重組人 CKB / Creatine kinase B type 蛋白
FCGRT & B2M Protein Mouse 重組小鼠 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白
M2-PK ( pyruvate Kinase M2 0.5mgM2-PK ( pyruvate Kinase M2) 酸激酶-M2(抗原)
CKB Protein Human 重組人 CKB / Creatine kinase B type 蛋白
CXCL9重組食蟹猴 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白 Protein
FCGRT & B2M Protein Mouse 重組小鼠 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白
FCGR2A重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 標(biāo)簽) Protein
人食管成纖維細(xì)胞大鼠瘦素受體(LEPR)試劑盒 ,,英文名: LEPR ELISA Kit
Mouse vitamin C (VC) ELISA Kit 小鼠C(VC)試劑盒
RatFMS-liketyrosinekinase3ligand,Flt-3LELISAKit 大鼠FMS樣酪激酶3配體(Flt3L)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHEV-IgM(HumanHepatitisDvirusIgM)ELISAKit人戊型肝病毒IgM
細(xì)胞SYK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKit1,3-βDglu大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶