詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
腎組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X7272 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
人腎足突分離自腎組織,;腎小球是腎元中的用于將血液過(guò)濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢,,被鮑氏囊所包裹,是尿液形成的重要構(gòu)造,。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球,。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管,匯流入靜脈,,而是流入出球小動(dòng)脈,。在腎小球內(nèi),微血管受到高壓,,而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進(jìn)行,。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,形成濾液,,滲入鮑氏囊內(nèi),。腎小球與鮑氏囊合稱(chēng)為腎小體,腎小球的過(guò)濾速率便稱(chēng)為腎小球過(guò)濾率,。足細(xì)胞(podocyte)即腎小囊臟層上皮細(xì)胞,,它附著于腎小球基底膜(GBM)的外側(cè),,連同GBM和毛細(xì)血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過(guò)屏障。足細(xì)胞特殊的解剖位置,,使得其體內(nèi)研究較為困難,;又由于正常成年機(jī)體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞,體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖,。足細(xì)胞呈星型多突狀,,胞體較大,由胞體伸出許多突起,,又稱(chēng)足突(FP),,呈指狀交叉復(fù)蓋于GBM外表面,并通過(guò)黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連,。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分,,IV型膠原和纖維連接蛋白(FN);在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和組織蛋白酶,,從而在GBM的代謝平衡中發(fā)揮重要作用,。足細(xì)胞之間鄰近的足突相互交替,形成了許多30-40nm的裂孔,,孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜,,即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過(guò)脈管系統(tǒng)的最后屏障,,對(duì)于維持腎小球?yàn)V過(guò)屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用,。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腎足突采用機(jī)械研磨過(guò)不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腎足突經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠瘦素(LEP)試劑盒 96T/48T
小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)試劑盒 96T/48T
小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin2(Eotaxin2/CCL24)試劑盒 96T/48T
小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)試劑盒 96T/48T
小鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA 試劑盒 96T/48T
One set of membrane protein (iNV) ELISA Kit 人套膜蛋白(iNV)試劑盒
Humanglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 人糖原合成酶激酶(GSK)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanbonesialoprotein,BSP試劑盒人骨涎蛋白(BSP)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物組織胞漿超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)分離試劑盒50次
HumanStaphylococalproteinA,SPAELISAKit人葡萄球菌蛋白A(SPA)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原鈣粘附蛋白β6抗體
RTL9蛋白抗體
HA重組甲型流感 H5N2 (A/ostrich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
Rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照 0.1mlRabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照)
EPHB6重組人 EphB6 / EphB6 蛋白 Protein
CLCF1 Protein Human 重組人 NNT1 / CLCF1 / CLC 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
ERBB4 Protein Human 重組人 HER4 / ErbB4 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
Rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照 0.1mlRabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照)
CLCF1 Protein Human 重組人 NNT1 / CLCF1 / CLC 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
HA重組甲型流感 H5N2 (A/ostrich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
ERBB4 Protein Human 重組人 HER4 / ErbB4 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
EPHB6重組人 EphB6 / EphB6 蛋白 Protein
人腎足突細(xì)胞大鼠絲蛋白結(jié)合LIM蛋白1(FBLIM1)試劑盒 ,英文名: FBLIM1 ELISA Kit
Mouse vitamin A (VA) ELISA Kit 小鼠A(VA)試劑盒
RatProgesterone,PROGELISAkit 大鼠孕激素/孕酮(PROG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHGH(Humangrowthhormone)ELISAKIT人生長(zhǎng)激素
細(xì)胞SPHK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKiX大鼠Ⅰ型膠原N末端肽
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞,;
2、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗(yàn),;
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),,淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng),;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。