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產品名稱：人軟骨細胞

組織來源：軟骨組織

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2~3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2，5%

細胞簡介：

人軟骨分離自軟骨組織,；軟骨組織由軟骨細胞,、基質及纖維構成。軟骨組織再生能力強,，這些增生的幼稚細胞形似纖維母細胞,，以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣毎⑿纬绍浌腔|,，細胞被埋在軟骨陷窩內而變?yōu)殪o止的軟骨細胞,。根據軟骨組織內所含纖維成分的不同，可將軟骨分為透明軟骨,、彈性軟骨和纖維軟骨三種,，其中以透明軟骨的分布較廣，結構也較典型,。軟骨細胞（chondrocyte）位于軟骨陷窩內,。幼稚的軟骨細胞位于軟骨組織的表層，單個分布,，體積較小,，呈橢圓形，長軸與軟骨表面平行,，越向深層的軟骨細胞體積之間增大呈圓形,，細胞核圓形或卵圓形，染色淺,，細胞質弱嗜堿性,，常見數量不一的脂滴,。成熟的軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內，這些軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成,，稱為同源細胞群,。電鏡下，軟骨細胞有突起和皺褶,，細胞質內有大量的粗面內質網和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體,。在組織切片中，軟骨細胞收縮為不規(guī)則形,，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙,。體外培養(yǎng)的軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。

方法簡介：

公司實驗室分離的人軟骨采用膠原酶-聯合消化制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的人軟骨經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）,、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

收到細胞如何處理,？

1、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象,。若有,，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,。

2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息,，如貼壁特性（貼壁/懸浮）,、細胞形態(tài),、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。

4,、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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