詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
乳腺癌組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7524 |
細胞簡介:
人乳腺癌成纖維分離自患有乳腺癌的女性乳腺組織;女性乳腺是由皮膚,、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的,,乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤,。乳腺癌中99%發(fā)生在女性,男性僅占1%,。乳腺并不是維持機體生命活動的重要器官,,原位乳腺癌并不致命;但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性,,細胞之間連接松散,,容易脫落。癌細胞一旦脫落,,游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身,,形成轉(zhuǎn)移,危及生命,。目前,,乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,,細胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的乳腺癌成纖維細胞呈圓形、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起,;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,,胞核清晰,,分布較均勻,散在生長,,不聚集成團,;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),,細胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,平坦,、胞體較大,,細胞質(zhì)透明,細胞核較大,,呈橢圓形,,顏色淡。細胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介:
公司實驗室分離的人乳腺癌成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人乳腺癌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠骨保護素配體(mouse OPGL) 作用: ELISA 規(guī)格: 進口分裝
小鼠血小板活化因子(mouse PAF) 作用: ELISA 規(guī)格: 進口分裝
小鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(mouse PAP) 作用: ELISA 規(guī)格: 進口分裝
小鼠血小板相關(guān)抗體IgG(mouse PAIgG) 作用: ELISA 規(guī)格: 進口分裝
小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat ai sperm aibody (AsAb) ELISA Kit 大鼠抗抗體(AsAb)試劑盒
HumanconcanavalinA,ConAELISAKit 人刀A(ConA)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanangiopoietin-likeprotein3,ANGPTL3試劑盒人血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物鈣ATP酶(Ca++-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次
IL-1αELISAKit魚類白介素1α(IL-1α)試劑盒規(guī)格:96T/48T
信號傳導(dǎo)T淋巴細胞活化相關(guān)蛋白抗體
Myc tag標(biāo)簽單克隆抗體
CCL3重組大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白 Protein
CX36 (Connexin-36 0.5mgCX36 (Connexin-36) 間隙連接蛋白36抗原
GPR56重組人 GPR56 / TM7LN4 蛋白 Protein
DUSP14 Protein Human 重組人 DUSP14 / MKP-6 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽)
F7 Protein Mouse 重組小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白
CX36 (Connexin-36 0.5mgCX36 (Connexin-36) 間隙連接蛋白36抗原
DUSP14 Protein Human 重組人 DUSP14 / MKP-6 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽)
CCL3重組大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白 Protein
F7 Protein Mouse 重組小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白
GPR56重組人 GPR56 / TM7LN4 蛋白 Protein
人乳腺癌成纖維細胞大鼠鐵反應(yīng)元件結(jié)合蛋白2(IREB2)試劑盒 ,,英文名: IREB2 ELISA Kit
Mouse myeloperoxidase specificity of ai neuophil cytoplasmic aibody IgG (MPO-ANCA IgG)ELISA Kit 小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)試劑盒
RatFreeThyroxine,FT4ELISAKit 大鼠游離甲狀腺素(FT4)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHO-1(Mousehemeoxygenase1)ELISAKit小鼠血紅素氧合酶1
細胞PKCβ1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
大鼠N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯大鼠N-乙?;?span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯大鼠N-乙?;?span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂?。?/p>
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長,;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行,。