人卵巢成纖維細胞

商品屬性：

細胞簡介：

人卵巢成纖維分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官,，卵巢的功能是產生卵以及類固醇激素,。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側發(fā)育（右側已退化）,，呈葡萄狀,，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡，卵泡呈黃色,，卵巢表面密布血管,。卵巢的大小與年齡和產卵期有關。大多數(shù)脊椎動物有兩個卵巢,，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構,，而所有鳥類只有左側卵巢有機能。卵巢是位于子宮兩側的一對卵圓形的生殖器官,，它的外表有一層上皮組織,，其下方有薄層的結締組織。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質,。皮質位于卵巢的周圍部分,，主要由卵泡和結締組織構成；髓質位于中央,，由疏松結締組織構成,，其中有許多血管、淋巴管和神經,。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的卵巢成纖維細胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長,，不聚集成團,；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細胞質透明，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細胞融合,，并彼此連接成網狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。卵巢成纖維細胞大多分布于卵巢表面,，其主要特點和功能：①成纖維細胞在體外易于培養(yǎng),；②卵巢損傷后，成纖維細胞能修復和重塑卵巢,；③能在卵巢炎癥時有效控制炎癥擴散,。

原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1,、細胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性；

　　2,、細胞接種時濃度要稍大一些,，至少為5×108細胞/L,；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；

　　4,、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

　　6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,，漂浮,；

　　7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液,；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液,。

　　二,、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,；

　　2,、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,；

　　3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗,；

　　4,、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子,，白血病細胞中要加入少量的原患者血清,，以利細胞生長；

　　5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行,。

方法簡介：

公司實驗室分離的人卵巢成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

公司實驗室分離的人卵巢成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。

　?、?消化培養(yǎng)法

　　③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞,，如白血病細胞,、淋巴細胞、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng),，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。

　　④器官培養(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。

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