詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
肝臟組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細胞樣 | YS-01X7168 |
細胞簡介:
人肝內(nèi)膽管上皮分離自肝臟組織;肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,,并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,;肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里的器官,,位于機體中的腹部位置,,在右側(cè)橫隔膜之下,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,,胃的上方,。肝臟是機體消化系統(tǒng)中的消化腺,為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官,,又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu):肝臟位于右上腹,,隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,大部分肝為肋弓所復蓋,,僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,肝上面則與膈及腹前壁相接,。通過控制激素調(diào)控的分泌和吸收,,在保持、調(diào)整和擴大膽小管的結(jié)構(gòu)中發(fā)揮重要作用,,肝內(nèi)膽管上皮細胞在先天性和獲得性免疫應(yīng)答方面起著積極作用,。肝內(nèi)膽管上皮細胞約占肝細胞總數(shù)的5%,其在肝內(nèi)膽道系統(tǒng)內(nèi)形成復雜的網(wǎng)狀管形結(jié)構(gòu),。肝內(nèi)膽管上皮細胞具有復雜的生理代謝功能,,參與肝臟的代謝,、排泌、免疫等生理過程,,在肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起一定的作用,。研究表明,常見的肝內(nèi)膽管病變例如原發(fā)性硬化性膽管炎,、膽管癌等疾病,,都是以肝內(nèi)膽管上皮細胞為病變靶位,進而引起肝內(nèi)膽管上皮損傷,。因此,,了解正常肝內(nèi)膽管上皮細胞的生物學特征和病變肝內(nèi)膽管上皮細胞的病理特征對研究肝內(nèi)膽管病變的發(fā)病機制、診斷和治療具有重要意義,。
方法簡介:
公司實驗室分離的人肝內(nèi)膽管上皮采用膠原酶灌注消化法后,,再用膠原酶-DNA酶聯(lián)合消化,接種至預(yù)先包被鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶中,,通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人肝內(nèi)膽管上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞,、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
兔子脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔子組織因子(TF)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔子組織多肽抗原(TPA)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠苯(LPA)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human general anscription complex (GTC) ELISA Kit 人通用轉(zhuǎn)錄復合體(GTC)試劑盒
HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4ELISAKit 人周期素依賴性激酶4(CDK-4)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanbreastcancersusceptibilityprotein1,BRCA-1試劑盒人癌易感蛋白1(BRCA-1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物組織細胞核高分離試劑盒10次
HumanSpecifieMacrophageArmingPaetot,SMAFELISAKit人特異性巨噬細胞武裝因子(SMAF)試劑盒規(guī)格:96T/48T
胚胎干細胞關(guān)鍵蛋白2抗體
周期素依賴性激酶9抗體
LGMN重組野豬 Legumain / LGMN / AEP 蛋白 Protein
NF2/merlin(neurofibromatosis type 2 0.5mgNF2/merlin(neurofibromatosis type 2) 2型神經(jīng)纖維瘤抗原
TNFRSF8重組人 CD30 / TNFRSF8 蛋白 Protein
GADD45G Protein Human 重組人 GADD45G / CR6 蛋白
CCNE1 Protein Mouse 重組小鼠 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白 (His & GST 標簽)
NF2/merlin(neurofibromatosis type 2 0.5mgNF2/merlin(neurofibromatosis type 2) 2型神經(jīng)纖維瘤抗原
GADD45G Protein Human 重組人 GADD45G / CR6 蛋白
LGMN重組野豬 Legumain / LGMN / AEP 蛋白 Protein
CCNE1 Protein Mouse 重組小鼠 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白 (His & GST 標簽)
TNFRSF8重組人 CD30 / TNFRSF8 蛋白 Protein
人肝內(nèi)膽管上皮細胞大鼠血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1(PECAM1)試劑盒 ,,英文名: PECAM1 ELISA Kit
Mouse coagulation (F x) ELISA Kit 小鼠Ⅹ(FⅩ)試劑盒
MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein4,IGFBP-4ELISAkit 小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumancoagulationfactorIX,FIXELISAKit人Ⅸ
細胞CDK5/P35激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitCR大鼠鈣結(jié)合蛋白
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長,;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行,。