詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
肝臟組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | YS-01X7186 |
細(xì)胞簡介:
人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞分離自肝臟組織,;肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用;肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里的器官,,位于機(jī)體中的腹部位置,在右側(cè)橫隔膜之下,,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,,胃的上方,。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中的消化腺,,為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,,又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu):肝臟位于右上腹,隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,,大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,,僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,,肝上面則與膈及腹前壁相接,。肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(SEC)是肝臟內(nèi)所占比例最高的非實質(zhì)細(xì)胞,,位于肝竇腔與肝細(xì)胞之間,具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運,、吞噬,、抗原提呈、免疫耐受等功能,。SEC由于擁有一般細(xì)胞所沒有的窗孔結(jié)構(gòu),、細(xì)胞間連結(jié)松散、內(nèi)皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性,,從而達(dá)到快速交換各種大小分子的目的,。肝在遭到多種病原侵襲時,肝竇內(nèi)皮細(xì)胞窗孔逐漸減少或消失,,內(nèi)皮下基膜形成,,產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu),這一過程稱為肝竇毛細(xì)血管化,。它由多種因素引起,,其過程極復(fù)雜,在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn),,近年來受到廣泛關(guān)注,。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細(xì)胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長,;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行。
方法簡介:
公司實驗室分離的人肝竇內(nèi)皮采用混合酶灌流消化,、反復(fù)低速離心,、密度梯度離心法,并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人肝竇內(nèi)皮經(jīng)CD31、CD14免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),,明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
兔子纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
兔子細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
兔子細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
兔子細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
小鼠表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA 試劑盒
Human aspaate aminoansferase / aspaate aminoansferase (GOT/GPT) ELISA Kit 人天門冬轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/GPT)試劑盒
Humanmitogenactivitedproteinkinase,MAPKELISAKit 人原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)試劑盒 進(jìn)口分裝
Humanbrain-gpeptides,BGP/Gehrelin試劑盒人腦腸肽(BGP/Gehrelin)試劑盒
植物組織微粒體分離試劑盒20次
Humanspleeyrosinekinase,SykELISAKit人脾臟酪激酶(Syk)試劑盒
(II)重鏈抗體
周期素D1重組兔單克隆抗體
CNDP2重組小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
Argireline peptide 抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3 1gArgireline peptide 抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3
GNGT1重組人 GNGT1 / GNG1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
GAD1 Protein Human 重組人 GAD67 / GAD1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
ACVR1 Protein Rat 重組大鼠 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白
Argireline peptide 抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3 1gArgireline peptide 抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3
GAD1 Protein Human 重組人 GAD67 / GAD1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
CNDP2重組小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
ACVR1 Protein Rat 重組大鼠 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白
GNGT1重組人 GNGT1 / GNG1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞大鼠血小板衍生生長因子A(PDGFA)試劑盒 ,英文名: PDGFA ELISA Kit
Mouse coagulation factor IX (F IX) ELISA Kit 小鼠Ⅸ(FⅨ)試劑盒
Mousehepatocytegrowthfactor,HGFELISAkit 小鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumancoagulationfactorVIIIrelatedaigen,FVIII-AgELISAKit人Ⅷ相關(guān)抗原
細(xì)胞CDK5/P25激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitIP-10/CXCL鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10