詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
肺組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7029 |
細胞簡介:
人肺血管平滑肌分離自肺組織,;肺是機體的呼吸器官,,位于胸腔,左右各一,,覆蓋于心之上,。肺有分葉,左二右三,,共五葉,。肺經(jīng)肺系(指氣管、支氣管等)與喉,、鼻相連,,故稱喉為肺之門戶,鼻為肺之外竅,。肺血管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形,核卵圓形,、居中,;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,,胞漿豐富,,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,,高低起伏;細胞密度低時,,常交織成網(wǎng)狀,;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點,。肺血管平滑肌細胞主要功能:①細胞表面表達介質(zhì)(ICAM-1和VCAM-1)參與血管壁炎癥反應(yīng),;②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細胞。肺血管平滑肌細胞與主要病生理變化:①平滑肌增生易致肺動脈高壓,;②先天性肺動脈狹窄,;③肺動脈栓塞。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關(guān)鍵因素,,最新研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎癥反應(yīng),,并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。
方法簡介:
公司實驗室分離的人肺微血管平滑肌采用混合膠原酶消化法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人肺微血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞,、淋巴細胞,、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠神經(jīng)降壓肽()試劑盒 96T/48T
小鼠神經(jīng)激肽B(NKB)試劑盒 96T/48T
小鼠神經(jīng)激肽A(NKA)試劑盒 96T/48T
小鼠上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)試劑盒 96T/48T
小鼠鼠痘病毒(MPV)試劑盒 96T/48T
Human gliadin IgA (Gliadin-IgA) ELISA Kit 人麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)試劑盒
HumangelsonELISAKit 人凝膠原蛋白(gelson)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Duckviruseeritis,DEV試劑盒鴨病毒性腸病毒(DEV)試劑盒規(guī)格:96T/48T
增強型DAB顯色溶液A液:10毫升B液:90毫升C液:1毫升
MousecyclophilinA,CyPAELISAKit小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)試劑盒規(guī)格:96T/48T
膜轉(zhuǎn)運蛋白XK抗體
脂滴包被蛋白A+B抗體
EGF重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
70kDa熱休克蛋白1樣蛋白(HSPA1L)重組蛋白 Recombinant Heat Shock 70kDa Protein 1 Like Protein (HSPA1L)
MKI67重組人 MKI67 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein
CLIC4 Protein Human 重組人 CLIC4 蛋白
ACE2 Protein Rat 重組大鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白
防御素β113(DEFβ113)重組蛋白 Recombinant Defensin Beta 113 (DEFb113)
CLIC4 Protein Human 重組人 CLIC4 蛋白
SEMA5A重組小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 蛋白 Protein
FCGRT & B2M Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白
TSPAN8重組人 TSPAN8 / Tetraspanin 8 / TM4SF3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
人肺微血管平滑肌大鼠胰島素樣蛋白3(INSL3)試劑盒 ,,英文名: INSL3 ELISA Kit
Mouse urokinase type plasminogen activator (uPA) ELISA Kit 小鼠型纖溶酶原激活物(uPA)試劑盒
Mouseansforminggrowthfactorα,TGF-αELISAKit 小鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanCoisolELISAKit人
細胞BMK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitBMP-7大鼠骨成型蛋白7
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性,;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L,;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細胞換液,;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,;
2、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗,;
4、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長,;
5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行。