相對定量分析方法  ：
 2-ΔΔCt
染料法熒光定量PCR試劑盒前提：目標序列和內參序列的擴增效率接近100％且偏差在5％以內
  1,、用內參基因的CT值歸一目標基因的CT值：
    ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
    ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
  2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值：
         ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
  3,、計算表達水平比率：
                    2 –ΔΔCT=表達量的比值

一,、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照,。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用,。

具有下列特點：
1.根據 指標的保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應,。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數量級,，可以達到幾百拷貝/反應。
3.即開即用,，用戶只需要提供樣品模板,，操作簡單，定量準確快速,。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,，避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR,。
6.本產品只適用于科研,，不能用于臨床診斷。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機,、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調移液器（2 µL、20
µL,、200 µL,、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應管,、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。

注意事項：
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,，若為長期冷凍組織,，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解,，影響PCR效率,。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產生沉淀,。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,，也可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀,，混勻后再使用,。
3. 電泳檢測時，切勿使用含有SDS的Loading Buffer,。否則,，電泳時會在泳道中出現一大團拖尾亮帶，影響實驗結果,。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內,，以便擴增效率佳,。
?5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作,。