產(chǎn)品僅用于科研購(gòu)買客戶請(qǐng)先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購(gòu)產(chǎn)品,、種屬,、貨號(hào)、數(shù)量,、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式,。向銷售人員索取細(xì)胞說(shuō)明書(shū)并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。點(diǎn)擊了解更多發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞,。
產(chǎn)品名稱 | Ar A4 感受態(tài)細(xì)胞 |
規(guī)格 | 100ul*10/100ul*50/100ul*100 |
貨號(hào) | YSRIBIO9746 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,,貨號(hào)21875-091),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
殺菌,;滲透增強(qiáng)蛋白樣檢測(cè)試劑盒 英文名稱:15-Hydroxydehydroabietic acid 純度:≥98%
死骨片1-泛素結(jié)合蛋白P62檢測(cè)試劑盒 英文名稱:9β,13β-Epidioxyabiet-8(14)-en-18-oic acid 純度:≥98%
轉(zhuǎn)錄激活因子MYB檢測(cè)試劑盒 英文名稱:6-Epidemethylesquirolin D 純度:≥98%
醌NADH脫氫酶1檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Tanshinlactone 純度:≥98%
CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Przewalskin 純度:≥98%
甲基胞嘧啶雙加氧酶2檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Deacetylpseudolaric acid A 純度:≥98%
淋巴增強(qiáng)因子-1檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Pinusolidic acid 純度:≥98%
Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Deacetylpseudolaric acid C2 純度:≥98%
跨膜受體蛋白Notch-1檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Phytol 純度:≥98%
白細(xì)胞介素36γ檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Isocupressic acid 純度:≥98%
受體激酶c-Met檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Spiramilactone B 純度:≥97%
英文名稱:Cinnzeylanol 純度:≥98%
血清淀粉樣蛋白A2檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Bulleyanin 純度:≥98%
血清淀粉樣蛋白A4檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Forskolin J 純度:≥98%
信號(hào)素3E檢測(cè)試劑盒 英文名稱:19-Hydroxybaccatin III 純度:≥99%
血管緊張素Ⅲ檢測(cè)試劑盒 英文名稱:2-Deacetoxytaxinine B 純度:≥90%
Ar A4 感受態(tài)細(xì)胞NIR1/RDGBA3 膜相關(guān)脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白一抗 * 0.2ml Elaidic acid
Fc ε RIα/Fc epsilon RI FC段IgE受體α多肽一抗 * 0.1ml Heptadecanoic acid
ELL 聚合酶延伸因子一抗 * 0.2ml Heptadecanoic acid
KNDC1 腦蛋白9一抗 * 0.2ml Leucomalachite Green
KCC2/SLC12A5 神經(jīng)細(xì)胞鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白一抗 * 0.1ml Methyl Arachidate
SPP24/SPP2 分泌性蛋白24一抗 * 0.2ml Methyl ricinoleate
phosphoCaM I (Ser 101) 化鈣調(diào)節(jié)素一抗 * 0.1ml Methyl behenate
phosphoSYT6(Thr418) 化突觸蛋白6一抗 * 0.1ml Methyl tetracosanoate
操作方法:
1. 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,,迅速插入冰中,,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),,冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,,迅速放回冰上并靜置2分鐘,,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),,混勻后37℃,,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌,,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上,。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,,將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h,。
基本共性:
1、所有的細(xì)胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜,,即細(xì)胞膜,。
2、所有的細(xì)胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA,。
3,、作為遺傳信息復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的載體。
4,、作為蛋白質(zhì)合成的機(jī)器—核糖體,,毫無(wú)例外地存在于一切細(xì)胞內(nèi),核糖體,,是蛋白質(zhì)合成的機(jī)器,,在細(xì)胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5,、所有細(xì)胞的增殖都以一分為二的方式進(jìn)行分裂,。
6、能進(jìn)行自我增殖和遺傳
7,、新陳代謝
8,、細(xì)胞都具有運(yùn)動(dòng)性,包括細(xì)胞自身的運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞內(nèi)部的物質(zhì)運(yùn)動(dòng)
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控,、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),,可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,,需要時(shí),,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察,、檢測(cè)和記錄
產(chǎn)品僅用于科研采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。