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產(chǎn)品名稱:小鼠前列腺基質(zhì)細胞
組織來源:前列腺
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳2-3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
小鼠前列腺基質(zhì)體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞簡介:
小鼠前列腺基質(zhì)分離自前列腺組織,;前列腺(Prostate)是雄性的性腺器官;前列腺是不成對的實質(zhì)性器宮,,由腺組織和肌組織構(gòu)成,。前列腺如栗子,底朝上,,與膀胱相貼,,尖朝下,抵泌尿生殖膈,,前面貼恥骨聯(lián)合,,后面依直腸。前列腺腺體的中間有尿道穿過,,扼守著尿道上口,,所以,前列腺有問題時,,排尿首先受影響,。前列腺是機體非常少有的,具有內(nèi),、外雙重分泌功能的性分泌腺,。作為外分泌腺,前列腺每天分泌前列腺液,,是構(gòu)成精液主要成分,;作為內(nèi)分泌腺,前列腺分泌的激素稱為“前列腺素",。常見疾病為良性前列腺增生,,在病理學(xué)上良性前列腺增生癥又稱前列腺結(jié)節(jié)狀增生,是前列腺中常見的產(chǎn)生癥狀的瘤樣病變,,結(jié)節(jié)開始發(fā)生可能是基質(zhì)細胞自發(fā)逆轉(zhuǎn)至胚胎階段,,其生長潛力可能是基質(zhì)-上皮之間的相互協(xié)同作用所致,終形成前列腺增生?;|(zhì)細胞是器官中結(jié)締組織細胞,,起到為器官中實質(zhì)細胞提供支持和營養(yǎng)的作用,成纖維細胞,、炎癥細胞,、免疫細胞以及周皮細胞都是常見的基質(zhì)細胞類型?;|(zhì)細胞和腫瘤細胞的相互作用在腫瘤細胞的生長過程中具有重要作用,。體外培養(yǎng)前列腺基質(zhì)細胞對治療前列腺增生有重要的研究意義。
方法簡介:
實驗室分離的小鼠前列腺基質(zhì)采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的小鼠前列腺基質(zhì)經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一、復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中),培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
a)、對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,,脫落后吸出,,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b),、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細胞懸起,,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理,?
1、首先,,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,。若有,,請拍照,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),。
2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3,、仔細閱讀細胞說明書,,了解細胞相關(guān)信息,,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。
4,、靜置完成后,,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢,、拍照,,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。
5,、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,,可正常傳代,;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松,。
6,、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),,補加培養(yǎng)基至5ml,;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作