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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,!
產(chǎn)品名稱:豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞
組織來(lái)源:骨骼肌
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基:含FBS、馬血清,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳3-5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
豬骨骼肌衛(wèi)星體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
豬骨骼肌衛(wèi)星分離自四肢肌肉組織,;骨骼肌又稱橫紋肌,肌肉中的一種,,約占全身重量的40%,。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞,肌膜的外面有基膜緊密貼附,。屬于橫紋肌,,橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,其中骨骼肌主要分布于四肢,。每塊肌肉都是具有一定形態(tài),、結(jié)構(gòu)和功能的器官,有豐富的血管,、淋巴分布,,在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張,進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng),。肌肉可根據(jù)共形狀,、大小、位置,、起止點(diǎn),、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌,、三角肌,、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀,,不分支,,有明顯橫紋,核很多,,且都位于細(xì)胞膜下方,。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶(Ⅰ帶)及暗帶(A帶),。明帶染色較淺,,而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線,。H線的中部有一M線,。明帶中間,有一條較暗的線稱為Z線,。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段,,叫做一個(gè)肌節(jié)。肌衛(wèi)星細(xì)胞指骨骼肌中除骨骼肌纖維(肌細(xì)胞)外的一種扁平,、有突起的細(xì)胞。著于肌纖維(肌細(xì)胞)表面,;當(dāng)肌纖維(肌細(xì)胞)受損后,,肌衛(wèi)星細(xì)胞可增殖分化,參與肌纖維(肌細(xì)胞)的修復(fù),,因此具有干細(xì)胞性質(zhì),。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的豬骨骼肌衛(wèi)星采用-膠原酶混合消化法結(jié)合多次差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的豬骨骼肌衛(wèi)星經(jīng)Desmin免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)步驟:
一,、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
二、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
a)、對(duì)于貼壁細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細(xì)胞,,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b)、對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
收到細(xì)胞如何處理,?
1,、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,,請(qǐng)拍照,,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2,、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,;先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書,,了解細(xì)胞相關(guān)信息,,如貼壁特性(貼壁/懸浮),、細(xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例,、所需細(xì)胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。
4、靜置完成后,,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢、拍照,,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),;建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照,、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%,,可正常傳代,;若未超過(guò)80%,,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),,直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松。
6,、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時(shí),,若細(xì)胞密度超過(guò)80%,,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml,;若細(xì)胞密度未超過(guò)80%,,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠抗單核細(xì)胞抗體試劑盒 小鼠抗單核細(xì)胞抗體試劑盒 小鼠抗單核細(xì)胞抗體試劑盒,,,,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠抗單核細(xì)胞抗體試劑盒,、小鼠抗單核細(xì)胞抗體eisa試劑盒
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GATA2/GATA3抗體
富含亮重復(fù)蛋白8D抗體
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VAPB重組人 VAPB / VAMP-associated protein B/C 蛋白 Protein
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Humaneyemuscleaibody,EMAbELISAKit 人抗眼肌抗體(EMAb)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
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