化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
骨髓 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 圓形、梭形,、多角形,，形態(tài)多樣 | YS-01X8292 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人骨髓樹突狀分離自骨髓,；骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌、病毒等,；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此，骨髓不但是造血器官,，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓,。出生時(shí),，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大,，脂肪細(xì)胞增多,，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細(xì)胞是由骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的,；樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞,，典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長(zhǎng)，在GM-CSF,、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,，細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多,，亦可見少量短刺狀突,，胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強(qiáng)的遷移能力,，伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞,，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα,、LPS等誘導(dǎo)而成,，多數(shù)呈懸浮生長(zhǎng)， 細(xì)胞呈圓形,，細(xì)胞體積進(jìn)一步增大,，表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞,。未成熟DC細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟,。DC細(xì)胞尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志，主要通過形態(tài)學(xué),、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志,、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80,、CD86等共刺激分子,，進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,，處于啟動(dòng),、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié),；未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力,，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,，不能激活T細(xì)胞的第二信號(hào),，可導(dǎo)致T細(xì)胞無能，從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹突狀細(xì)胞表面CD80,、CD86,、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低，一般在30%以下,。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性,；
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,，至少為5×108細(xì)胞/L,；
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,，漂浮,；
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液,；
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞,；
2,、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,；
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn),；
4,、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,，以利細(xì)胞生長(zhǎng),；
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；
6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行,。
方法簡(jiǎn)介：
實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓未成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞,、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓樹突狀(未成熟DC細(xì)胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定,、細(xì) 胞 形態(tài)等綜合鑒定，純度可達(dá)80%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形,、梭形、多角形,，形態(tài)多樣
傳代特性：屬于高度分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
人骨髓樹突狀(未成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)試劑盒 96T/48T
小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)試劑盒 96T/48T
小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)試劑盒 96T/48T
小鼠抗心肌抗體(AMA)試劑盒 96T/48T
小鼠內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human spleen tyrosine kinase (Syk) ELISA Kit 人脾臟酪激酶(Syk)試劑盒
HumanATP-bindingcassetteanspoerA1,ABCA1ELISAKit 人腺苷三0酸結(jié)合 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanADisiegrinAndMetalloprotease10,ADAM10試劑盒人解整合素樣金屬蛋白酶10(ADAM10)試劑盒規(guī)格：96T/48T
正常男性人體肝組織S9組分(5毫克/毫升)500微升
MouseAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)試劑盒規(guī)格：96T/48T
G蛋白偶聯(lián)受體52抗體
神經(jīng)調(diào)節(jié)肽S抗體
CD47重組大鼠 CD47 蛋白 Protein
FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子)抗原
MICA重組人 MICA 蛋白 Protein
CST9L Protein Human 重組人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
EPHA6 Protein Mouse 重組小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)
FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子)抗原
CST9L Protein Human 重組人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
CD47重組大鼠 CD47 蛋白 Protein
EPHA6 Protein Mouse 重組小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)
MICA重組人 MICA 蛋白 Protein
人骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟DC細(xì)胞)大鼠白介素15(IL-15)試劑盒 ,，英文名： IL-15 ELISA Kit
Mouse pyruvate kinase (PK) ELISA Kit 小鼠酸激酶(PK)試劑盒
ELISA 小鼠抑制素B(mouse Inhibin B) 進(jìn)口分裝
CLIAKitforIL-2R(MouseIerleukin-2receptor)ELISAkit小鼠白介素2受體
通用型離子(K)濃度化學(xué)比色法定量試劑盒50次
ELISAKitN-AChR大鼠型乙酰受體
化工儀器網(wǎng)