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產(chǎn)品名稱：人外周血T淋巴細(xì)胞
組織來源：外周血
產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含IL-2、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形
傳代特性：不建議傳代
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
人外周血T淋巴體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞簡介：
人外周血T淋巴分離自外周血,；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念,。外周血單個核細(xì)胞（PBMC）即外周血中具有單個核的細(xì)胞,，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。目前,，主要的分離方法是密度梯度離心法,，因為血液中各有形成分的比重存在差異，因此得以分離出不同的細(xì)胞,。T淋巴細(xì)胞（T-lymphocyte）來源于骨髓的多能干細(xì)胞（胚胎期則來源于卵黃囊和肝）,。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細(xì)胞或前T細(xì)胞遷移到胸腺內(nèi),，在胸腺激素的誘導(dǎo)下分化成熟,，成為具有免疫活性的T細(xì)胞。成熟的T細(xì)胞經(jīng)血流分布至外周免疫器官的胸腺依賴區(qū)定居,，并可經(jīng)淋巴管,、外周血和組織液等進(jìn)行再循環(huán)，發(fā)揮細(xì)胞免疫及免疫調(diào)節(jié)等功能,。T細(xì)胞的再循環(huán)有利于廣泛接觸進(jìn)入體內(nèi)的抗原物質(zhì),，加強免疫應(yīng)答，較長期保持免疫記憶,。T細(xì)胞的細(xì)胞膜上有許多不同的標(biāo)志,，主要是表面抗原和表面受體。這些表面標(biāo)志都是結(jié)合在細(xì)胞膜上的巨蛋白分子,。多能干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨蜆忧绑w細(xì)胞（Lymphoid precursor）遷移至胸腺,，在的誘導(dǎo)下，經(jīng)歷一系列有序的分化過程,，逐漸在胸腺發(fā)育成熟為識別各種抗原的T細(xì)胞庫,。T淋巴細(xì)胞進(jìn)入胸腺后首先經(jīng)歷兩個階段：①早期T淋巴細(xì)胞發(fā)育階段，即始祖CIM和CD8雙陰性T淋巴細(xì)胞（double negative cell,，DN）分化為CD4和CD8雙陽性T細(xì)胞（double positive cell,，DP）,；②DP細(xì)胞分別經(jīng)歷陽性選擇階段和陰性選擇階段獲取MHC限制性識別能力和對自身抗原的耐受性，發(fā)育為其表面標(biāo)志為CD4或CD8的單陽性T細(xì)胞（single positive cell,，SP）,，遷往周圍淋巴器官定居。T細(xì)胞是相當(dāng)復(fù)雜的不均一體,、又不斷在體內(nèi)更新,、在同一時間可以存在不同發(fā)育階段或功能的亞群，但分類原則和命名比較混亂,，尚未統(tǒng)一,。按免疫應(yīng)答中的功能不同，可將T細(xì)胞分成若干亞群,，一致的有：1,、輔助性T細(xì)胞（Helper T cells,Th），具有協(xié)助體液免疫和細(xì)胞免疫的功能,；2,、抑制性T細(xì)胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制細(xì)胞免疫及體液免疫的功能,；3,、效應(yīng)T細(xì)胞（Effector T cells,Te），具有釋放淋巴因子的功能,；4,、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Cytotoxic T cells,Tc），具有殺傷靶細(xì)胞的功能,；5,、遲發(fā)性反應(yīng)T細(xì)胞（Delayed type hypersensitivity T cells,Td），有參與Ⅳ型反應(yīng)的作用,；放大T細(xì)胞（Ta）,，可作用于Th和Ts，有擴(kuò)大免疫效果的作用,；6,、原始的或天然T細(xì)胞（Virgin or Natural T cells），他們和抗原接觸后分化成效應(yīng)T細(xì)胞和記憶T細(xì)胞,；7,、記憶T細(xì)胞（Memory T cell,Tm），有記憶特異性抗原刺激的作用,。T細(xì)胞在體內(nèi)存活的時間可數(shù)月至數(shù)年,。其記憶細(xì)胞存活的時間則更長。其中，Th細(xì)胞又被稱為CD4+細(xì)胞,，因為其在表面表達(dá)CD4（cluster of differentiation 4）,。通過與MHCⅡ（主要組織相容性復(fù)合體，major histocompatibility complex）遞呈的多肽抗原反應(yīng)被激活,。MHCⅡ在抗原遞呈細(xì)胞（antigen presenting cells,APCs）表面表達(dá),。一旦激活，可以分泌細(xì)胞因子,，調(diào)節(jié)或者協(xié)助免疫反應(yīng)。Tc細(xì)胞又名為CD8+細(xì)胞,，其表面表達(dá)CD8,。這類細(xì)胞可以通過MHCI與抗原直接結(jié)合。淋巴細(xì)胞主要包括T淋巴細(xì)胞（CD3+）,，B淋巴細(xì)胞（CD19+）,，NK細(xì)胞（CD16+CD56+）。
方法簡介：
實驗室分離的人外周血T淋巴采用取外周血,、通過密度梯度離心法結(jié)合磁珠分選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的人外周血T淋巴經(jīng)CD3免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟：
一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
a）、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b）,、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
收到細(xì)胞如何處理,？
1,、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,，請拍照,，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2,、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。
4,、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）,；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài),。
5,、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松。
6,、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%,，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%,，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作
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