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產品名稱：人胃癌成纖維細胞

組織來源：胃癌

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右,；3代以內狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

人胃癌成纖維體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞簡介：

人胃癌成纖維分離自患有胃癌病人的胃癌組織,；胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發(fā)病率居,，胃癌可發(fā)生于胃的任何部位,，其中半數以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎,、胃小彎及前后壁均可受累,，絕大多數胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉移的過程中,，涉及諸多復雜的過程,，如細胞外基質的硬化和降解、新生血管的形成等,，而這些過程會直接或間接的引起腫瘤微環(huán)境(Tumor mircoenvironment)的改變,。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細胞生存的外部環(huán)境，由不同種類的非腫瘤性的細胞與細胞外基質(Extracellular matrix,，ECM)構成,，包括纖維細胞，免疫細胞,，內皮細胞,，間充質干細胞等，腫瘤細胞通過調控這些間質細胞,，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉移的條件,，從而使得腫瘤得到進展。越來越多的證據表明,，腫瘤微環(huán)境的改變在腫瘤進展中扮演著重要的角色,。在腫瘤微環(huán)境中，研究多也是主要的間質細胞是腫瘤相關成纖維細胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs),。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細胞和成纖維細胞樣細胞演化而來,。胃癌成纖維細胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。剛分離的胃癌成纖維細胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起,；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長,，不聚集成團,；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細胞質透明，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細胞融合,，并彼此連接成網狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

實驗室分離的人胃癌成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

實驗室分離的人胃癌成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）,、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）,、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數換液方式,，棄半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

收到細胞如何處理,？

1,、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現象,。若有，請拍照,，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息,，如貼壁特性（貼壁/懸浮）,、細胞形態(tài),、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等,。

4、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松,。

6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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