詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
椎間盤 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 梭形,、多角形 | YS-01X8313 |
細(xì)胞簡介:
人終板軟骨分離自椎間盤終板軟骨組織;椎體終板是椎體在生長發(fā)育過程中,, 椎體上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板,,呈輕度凹陷,即為骨性終板,。椎體終板的中央仍為一薄層透明軟骨覆蓋,,并終生存在,即為軟骨終板,,上下軟骨終板與髓核和纖維環(huán)連接共同構(gòu)成椎間盤,。椎體終板構(gòu)成了椎間盤的上下邊界,位于椎體中心的松質(zhì)骨和椎間盤之間,。是由軟骨下骨和厚度相當(dāng)?shù)母采w其上的軟骨組成,。主要作用是防止椎間盤髓核組織嵌入椎體,同時具有平衡分散應(yīng)力的作用,。成熟的終板軟骨細(xì)胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi),,這些終板軟骨細(xì)胞由同一個母細(xì)胞分裂增殖而成,稱為同源細(xì)胞群,。電鏡下,,終板軟骨細(xì)胞有突起和皺褶,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體,。在組織切片中,,終板軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形,在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙,。體外培養(yǎng)的終板軟骨細(xì)胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。
方法簡介:
實驗室分離的人終板軟骨采用膠原酶 - 聯(lián)合消化并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的人終板軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS,、EGF、Insulin,、Transferrin,、Selenium Solution、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每3-4天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):梭形,、多角形
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
人終板軟骨體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
豬可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISAKit ELISA.
豬白介素13(IL-13)ELISAKit ELISA.
豬轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)ELISAKit ELISA.
豬E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISAkit ELISA.
豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)試劑盒
Human basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit 人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)試劑盒
PorcineMethemoglobin,MHBELISAKit 豬高鐵血紅蛋白(MHB)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAmAC-1(HumanAlternativemacrophageactivation-associatedCCchemokine1)ELISAKit人巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1
血液果糖-1,6-二0酸縮酶(ALD)定量試劑盒20次
PorcineActivinA,ACV-AELISAKit豬活化素A(ACV-A)試劑盒
PAPLN蛋白多糖樣硫酸化糖蛋白抗體
同源盒基因HOXA3蛋白抗體
TNFRSF1B重組小鼠 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 蛋白 Protein
ATM(ataxia telangiectasia mutated 0.5mgATM(ataxia telangiectasia mutated) 毛細(xì)血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗原
TPO重組人 Thyroid peroxidase / TPO 蛋白 (257 Ser/Ala, 725 Pro/Thr, His 標(biāo)簽) Protein
APP Protein Human 重組人 Beta-amyloid 40 / Beta-APP40 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
CD40 Protein Rat 重組大鼠 CD40 / TNFRSF5 蛋白 (His 標(biāo)簽)
ATM(ataxia telangiectasia mutated 0.5mgATM(ataxia telangiectasia mutated) 毛細(xì)血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗原
APP Protein Human 重組人 Beta-amyloid 40 / Beta-APP40 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
TNFRSF1B重組小鼠 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 蛋白 Protein
CD40 Protein Rat 重組大鼠 CD40 / TNFRSF5 蛋白 (His 標(biāo)簽)
TPO重組人 Thyroid peroxidase / TPO 蛋白 (257 Ser/Ala, 725 Pro/Thr, His 標(biāo)簽) Protein
人終板軟骨細(xì)胞大鼠γ干擾素(IFNγ)試劑盒 ,英文名: IFNγ ELISA Kit
Rabbit soluble P selectin (sP-s 兔子可溶性P選擇素(sP-s
ELISA 小鼠巨嗜細(xì)胞性蛋白-1a(mouse MIP-1a/CCL3) 進口分裝
CLIAKitforIL-18ElisaKit大鼠白介素18
通用型鯉魚春季病毒血癥(SpringViraemiaofCarp;SVC)試劑盒20次
ELISAKitHO-2大鼠血紅素氧合酶2
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細(xì)胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞,;
2,、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗,;
4,、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進行