操作步驟:

1）使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7）每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8）取出酶標板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法：
一,、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關(guān),，我司嚴格按照進行，已獲得國家承認的“三證”,，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號,，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,，不必擔心會有過期的試劑,。我司的試劑，值得您選擇,。
2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后,，再進行測定,，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度,，以滿足后面的測定需求,。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風濕因子,、補體,、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體,、某些自身抗體等,；
類風濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理,；
③檢測抗原時,，可用加入到標本稀釋液中使RF降解；
補體的控制方法：
①用EDTA稀釋標本,；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活,；
2.外源性干擾因素：包括標本溶血、細菌污染,、保存時間過長或凝固不全等,；
控制方法：采血時規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩,，以防溶血,；收集標本時采用無菌試管，經(jīng)檢測后再低溫凍存,；保存時間不宜過久,，檢測時盡量采用新鮮標本,；對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h,，待充分凝固后再離心分離血清,。

具有如下優(yōu)點：
一、高效,、靈敏,、特異的抗體；
二,、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,；
三、吸附性能好,，空白值低,，孔底透明度高的固相載體；
四,、適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標本類型；
五,、性價比非常好,，節(jié)省實驗經(jīng)費。

Cinmethylin環(huán)庚草87818313

Butyramide酰541355

FMOCPHE(4NO2)WANGRESINFMOCPHE(4NO2)WANGRESIN

3,3'Dichlorobenzidine3,3'二聯(lián)91941

agrimolB仙鶴草酚B55576664

3Bromobenzonitrile間溴6952596

Methyleugenol香酚93152

Phosphoruspentasulfide五化二1314803

Entecavir恩替卡韋142217694

Dihydrocapsaicin二辣椒19408845

Methylanisate4121982

Trimethylsilylacetylene三硅炔1066542

1Bromo3chloropropane1溴3109706

lycorenine石蒜477190

Ethylisobutyrylacetate異酰7152150

伸筋草Lycopodiumclavatum保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

扶芳藤Euonymusfortunei保存：20℃,，避光規(guī)格：10.0g

蘆根Reedrhizome保存：20℃，避光規(guī)格：1g

花椒(青椒)Pepper (pepper)保存：20℃,，避光規(guī)格：2g

麥芽Malt保存：20℃,，避光規(guī)格：5g

卷柏(墊狀卷柏)Selaginella (Selaginellapulvinata)保存：20℃，避光規(guī)格：2g

紅芪RadixHedysari保存：20℃,，避光規(guī)格：5g

紅大戟Knoxiavalerianoides保存：20℃,，避光規(guī)格：3g

肉蓯蓉RouCongrong保存：20℃，避光規(guī)格：1g

百合Lily保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

土荊皮(金錢松)CortexPseudolaricis (JinQiansong)保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

石菖蒲ShiChangpu保存：20℃，避光規(guī)格：1.0g

火麻仁Fructuscannabis保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

烏藥Lindera保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

牛膽粉Oxbilepowder保存：20℃，避光規(guī)格：50mg
CK-20 elisa試劑盒Cholic Acid大鼠神營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA Kit，48T/96T 200mg

Bilirubin兔子神營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA Kit,，48T/96T 100mg

Rubimaillin人骨保護素(OPG)ELISA Kit,，48T/96T 200mg

Clinodiside A小鼠骨保護素(OPG)ELISA Kit，48T/96T 200mg

hydroxysafflor yellow A大鼠骨保護素(OPG)ELISA Kit,，48T/96T 100mg

Butane diacid雞B因子(BF)ELISA Kit,，48T/96T 50mg

人B因子(BF)ELISA Kit，48T/96T 50mg

12236-29-2重組人 SerpinB6 / PI-6 蛋白 (His 標簽) 分散黃39

2814-77-9重組人 TLK2 / PKU-ALPHA 蛋白 (aa 397-772, His & GST 標簽) 顏料紅4

2519-30-4重組人 IL16 / Interleukin-16 蛋白 (His 標簽) 食品黑1

測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準確
3.管底加樣,，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴 
1.加標本后和加結(jié)合物后,，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起,。
3.為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中,。
4.加入底物后,，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,，ELISA板可避光放在實驗臺上,，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時,，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌 
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵,。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板 
1.陰性對照顏色極淺,，在定性測定中一般 可采用目視比色,。
2.如用酶標儀測定結(jié)果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度,、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法,。