操作步驟:

1）使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
4）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
7）每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘。避免光照,。
8）取出酶標板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值,。

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關(guān),，我司嚴格按照進行,，已獲得國家承認的“三證”，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號,，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,，不必擔(dān)心會有過期的試劑,。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來,，在室溫下放置20-30 min后,，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡,，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度,，以滿足后面的測定需求。
二,、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子,、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白,、異嗜性抗體,、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG,；
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理,；
③檢測抗原時，可用加入到標本稀釋液中使RF降解,；
補體的控制方法：
①用EDTA稀釋標本,；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；
2.外源性干擾因素：包括標本溶血,、細菌污染,、保存時間過長或凝固不全等；
控制方法：采血時規(guī)范操作,，采集的血液勿用力震蕩,，以防溶血；收集標本時采用無菌試管,，經(jīng)檢測后再低溫凍存,；保存時間不宜過久，檢測時盡量采用新鮮標本,；對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑,，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清,。

具有如下優(yōu)點：
一,、高效、靈敏,、特異的抗體,；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,；
三,、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體,；
四,、適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型,；
五,、性價比非常好，節(jié)省實驗經(jīng)費,。

1,1'-聯(lián)-2-萘酚1,1'-Bi-2-naphthol>99.0%(GC)度：≥98%

1-(4-硝基)-3-基-5-苯基臢1-(4-Nitrophenyl)-3-methyl-5-phenylformazan>98.0%(LC)度：≥98%

1-(4-氨基)胍鹽AGMATINESULFATESALT(P)度：≥98%

1-(4-氨基)胍鹽AGMATINESULFATESALT(P)度：≥98%

1-(4-氨基)胍鹽AGMATINESULFATESALT(P)度：≥97%

1-(4-氨基)胍鹽AGMATINESULFATESALT(P)度：≥98%

(6-溴-2-萘基)-α-D-吡半糖苷BROMO-2-NAPHTHYL-a-D-GALACTOPYRANOSIDE,6-(RG)(PLEASECALL)度：98%

(2-溴基)苯(2-Bromoethyl)benzene>97.0%(GC)度：≥98%

肉豆蔻Nutmeg保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

白術(shù)RhizomaAtractylodisMacrocephalae保存：20℃，避光規(guī)格：0.5g

平貝母Fritillariaussuriensis保存：20℃,，避光規(guī)格：5g

丹參Salviamiltiorrhiza保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

五味子(北五味子)Schisandra (Schisandrachinensis)保存：20℃，避光規(guī)格：1g

木香MuXiang保存：20℃,，避光規(guī)格：0.5g

馬兜鈴Aristolochia保存：20℃,，避光規(guī)格：3g

廣防已AristolochiaFangchi保存：20℃，避光規(guī)格：3g

川芎LigusticumchuanxiongHort保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

人參Ginseng保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

薄荷Mint保存：20℃，避光規(guī)格：0.5g

檳榔Betelnut保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

紫蘇葉ZiSuye保存：20℃,，避光規(guī)格：1g

黃連（三角葉黃連）Coptischinensis (River YeHuanglian)保存：20℃，避光規(guī)格：0.5g

益母草Motherwort保存：20℃,，避光規(guī)格：1g
CK-HMW elisa試劑盒523-21-7重組人 AKR1B1 蛋白 (His 標簽) 玫瑰紅鈉

581-64-6重組人 APEX1 / AP / APEx / Ref-1 蛋白 (His 標簽) 勞氏紫

1226-46-6重組人 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (His 標簽) 代米氏酮

125-20-2重組人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 標簽) 百里香酚酞 Neomangiferin人單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit,，48T/96T 200mg

Menthol小鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit，48T/96T 1．5g

1-Butanol大鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit,，48T/96T 1g

Ginsenoside Rh1人巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit,，48T/96T 20mg

Scoparone小鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit，48T/96T 1g

Dauricine大鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit,，48T/96T 200mg

Loganin人巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA Kit,，48T/96T 200mg

測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴 
1.加標本后和加結(jié)合物后,，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱,。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋,，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中,。
4.加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求,。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上,，以便 不時觀察,，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應(yīng),。
3.洗滌 
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。
4.讀板 
1.陰性對照顏色極淺,，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結(jié)果,，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度,、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。