詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
食管組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7114 |
細(xì)胞簡介:
小鼠食管平滑肌分離自食管組織;食管可分為頸段,、胸段和腹段,,脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,胸段位于左,、右肺之間的縱膈內(nèi),胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連,,腹段很短與胃相連,。哺乳動物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層:黏膜層、黏膜下層,、肌層和外膜,。其中,肌層上1/3段為骨骼肌,,下1/3為平滑肌,,中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中,,肌纖維的排列方式分為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層,。食管的蠕動是由食管平滑肌收縮嚴(yán)格控制,食管還有括約肌,,位于環(huán)狀軟骨水平的,,稱為食管上括約肌,;位于食管下端,,一部分在膈上,穿過膈孔,,另一部分在膈下的高壓帶,,稱為食管下括約肌。食管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,,可見細(xì)胞貼壁伸展,,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形,核卵圓形,、居中,;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,,有分枝狀突起,,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏,;細(xì)胞密度低時,,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,,則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長較快,4-6天即可匯合,,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點,。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠食管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠食管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
血管內(nèi)皮生長因子A 英文名稱: vascuiar endothelial growth factor A 規(guī)格: 英文縮寫: VEGF-A
血管內(nèi)皮生長因子C 英文名稱: vascuiar endothelial growth factor C 規(guī)格: 英文縮寫: VEGF-C
血管內(nèi)皮生長因子D 英文名稱: vascuiar endothelial growth factor D 規(guī)格: 英文縮寫: VEGF-D
血管內(nèi)皮生長因子165 英文名稱: vascuiar endothelial growth factor 165 規(guī)格: 英文縮寫: VEGF165
小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 人顆粒酶A(Gzms-A)試劑盒
Humaelaxin,RLNELISAKit 人松弛肽/松弛素(RLN)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitfor6-OHDA(Human6-hydroxydopamine)ELISAKit人6-羥多巴胺
銀染法組織端粒酶活性AP電泳分析試劑盒10次
MouseMelatonin,MTELISAKit小鼠褪黑素(MT)試劑盒規(guī)格:96T/48T
α-(1,3)-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶 4單克隆抗體
PerCP-Cy5.5標(biāo)記人CD10單克隆抗體
HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型)
REG3A重組人 REG3A / HIP 蛋白 Protein
CCL28 Protein Human 重組人 CCL28 蛋白
IL6R Protein Human 重組人 IL6R / CD126 蛋白
Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型)
CCL28 Protein Human 重組人 CCL28 蛋白
HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
IL6R Protein Human 重組人 IL6R / CD126 蛋白
REG3A重組人 REG3A / HIP 蛋白 Protein
小鼠食管平滑肌細(xì)胞大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)試劑盒 ,英文名: DAT ELISA Kit
Porcine noradrenaline (NE) ELISA Kit 豬去甲(NE)試劑盒
蝦特定基因序列(FC)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforLXA4(HumanLipoxinA4)ELISAKit人脂氧素A4
體液總抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量試劑盒50次
ELISAKitVEGF雞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞,;
2、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗,;
4,、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行