操作步驟:

1）使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7）每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法：
一,、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),，我司嚴(yán)格按照進行，已獲得國家承認(rèn)的“三證”,，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號,，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,，不必擔(dān)心會有過期的試劑,。我司的試劑，值得您選擇,。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來,，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定,，使試劑盒在使用前與室溫平衡,，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求,。
二,、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補體,、高濃度的非特異免疫球蛋白,、異嗜性抗體、某些自身抗體等,；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG,；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時,，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解,；
補體的控制方法：
①用EDTA稀釋標(biāo)本；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活,；
2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血,、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等,；
控制方法：采血時規(guī)范操作,，采集的血液勿用力震蕩,，以防溶血；收集標(biāo)本時采用無菌試管,，經(jīng)檢測后再低溫凍存,；保存時間不宜過久，檢測時盡量采用新鮮標(biāo)本,；對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清,。

具有如下優(yōu)點：
一、高效,、靈敏,、特異的抗體；
二,、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,；
三、吸附性能好,，空白值低,，孔底透明度高的固相載體；
四,、適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五,、性價比非常好,，節(jié)省實驗經(jīng)費。

樣品杯N-芐氧羰基-L-天冬氨4-酯P-Selectin;CD62P;GMP140Na-K-ATP酶檢測試盒

樣品杯3',4'-(亞基二氧)苯酮TLR2P選擇素檢測試盒

樣品杯3',4'-(亞基二氧)苯酮TLR4Toll樣受體2檢測試盒

深孔板SodiummesoxalatemonohydrateCD3,CD4,CD8Toll樣受體4檢測試盒

深孔板4-硝基鄰苯二腈α1-AGPT淋巴細胞亞群檢測試盒

采樣杯6-氨基煙Galα1性糖蛋白檢測試盒
LH elisa試劑盒phospho-ATF2(Ser472)SsiI (AciI)200 units小鼠胰蛋白酶-1(trypsin-1)免疫試盒

42097FaqI (BsmFI)100 units小鼠胰蛋白酶(trypsin)免疫試盒

phospho-Aconitase 1 (Ser711)NoLimits™ 50 bp DNA Fragment10 µg小鼠黑色素細胞抗體(MC Ab)免疫試盒

phospho-Acetyl Coenzyme A Carboxylase beta (Ser220)NoLimits™ 75 bp DNA Fragment10 µg小鼠黑色素瘤免疫試盒

Annexin VINoLimits™ 100 bp DNA Fragment10 µg小鼠核轉(zhuǎn)錄因子kBP65(NFkBP65)免疫試盒

ANKRD42NoLimits™ 250 bp DNA Fragment10 µg小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)免疫試盒

AnillinNoLimits™ 600 bp DNA Fragment10 µg小鼠核因子κB(NF-κB)免疫試盒

Adenovirus 5 E1A binding proteinNoLimits™ 750 bp DNA Fragment10 µg小鼠核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)免疫試盒

APOA1NoLimits™ 800 bp DNA Fragment10 µg小鼠核糖核酶,核糖核酶A家族(肝臟,嗜性粒細胞源性神經(jīng)毒素)(RNASE2)免疫試盒

ATG16LNoLimits™ 900 bp DNA Fragment10 µg小鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激酶2(Tie-2)免疫試盒 phospho-ASK1 (Ser83)phospho-ATXN1 (Ser775)小鼠白細胞活化黏附因子(ALCAM)免疫試盒

測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴 
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起,。
3.為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中,。
4.加入底物后,，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,，ELISA板可避光放在實驗臺上,，以便 不時觀察,，待對照管顯色適當(dāng)時，即可終止酶反應(yīng),。
3.洗滌 
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。
4.讀板 
1.陰性對照顏色極淺,，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果,，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度,、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。