操作步驟:

1）使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí),。
4）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
7）每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9）在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法：
一,、試劑
1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),，我司嚴(yán)格按照進(jìn)行，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”,，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào),，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,，不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑,。我司的試劑，值得您選擇,。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來,，在室溫下放置20-30 min后,，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡,，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,，以滿足后面的測(cè)定需求。
二,、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子,、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白,、異嗜性抗體,、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG,；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理,；
③檢測(cè)抗原時(shí)，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解,；
補(bǔ)體的控制方法：
①用EDTA稀釋標(biāo)本,；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；
2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血,、細(xì)菌污染,、保存時(shí)間過長(zhǎng)或凝固不全等；
控制方法：采血時(shí)規(guī)范操作,，采集的血液勿用力震蕩,，以防溶血；收集標(biāo)本時(shí)采用無菌試管,，經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存,；保存時(shí)間不宜過久，檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本,；對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清,。

具有如下優(yōu)點(diǎn)：
一,、高效、靈敏,、特異的抗體,；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,；
三,、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體,；
四,、適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型,；
五,、性價(jià)比非常好，節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),。

SM(sphingomyelin)ELISAKit人鞘脂CAS:402460進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：15mg

UFC(urinaryfreecortisol)ELISAKit人尿游離皮質(zhì)CAS:14056進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：25mg

ASCA(Anti-Saccharomycescerevisiaeantibody)ELISAKit人抗釀酒酵母抗體CAS:5961進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：200mg

VLA4(verylateappearingantigen4)ELISAKit人遲現(xiàn)抗原4CAS:進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：25mg

AO(AcrineOrange)ELISAKit人吖橙CAS:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：50mg

MTX(methotrexate)ELISAKit人喋呤CAS:131181進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：75mg

PABA(para-aminobenzoicacid)ELISAKit人對(duì)氨基CAS:進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：25mg

LPA(L-phenylalanine)ELISAKit人氨CAS:526998進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：50mg

Irna(ImmuneRNA)ELISAKit人免疫核糖核CAS:NA進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：10mg

Beta-Nph(Beta-naphthol)ELISAKit人βCAS:90021進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：1vial

BLI(Beta-Lactamaseinhibitors)ELISAKit人β內(nèi)酰酶抑制CAS:1457812進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：100mg

Gal(Alpha-galactoyl)ELISAKit人α半糖基抗體CAS:進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：2mg

AlphaNAG(AlphaN-acetylglucosaminidase)ELISAKit人αN已酰氨基葡糖苷酶CAS:進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：1．0mg

Alpha2-PI(Alpha2-plasmininhititor)ELISAKit人α2纖溶酶抑制物CAS:14057進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：200mg

人高香草(HVA)ELISAKit人高香草CAS:1070079進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：150mg
TRAIL R1 elisa試劑盒商陸黃素Fura-2, pentasodium salt  cAMPβ-乳球蛋白檢測(cè)試盒

商陸皂甙 BIndo-1, AM GAPC環(huán)腺苷檢測(cè)試盒

蛇根亭Indo-1, AMTNF-γ乳房鏈球菌檢測(cè)試盒

蛇莓甙AIndo-1, AM *1 mM solution in anhydrous DMSO*  IFN-β腫瘤壞死因子γ檢測(cè)試盒

蛇紋石素Indo-1, pentapotassium salt  EG-Abβ干擾素檢測(cè)試盒

伸筋草萜寧Indo-1, pentasodium salt β-lactamase細(xì)粒棘球絳抗體檢測(cè)試盒

測(cè)定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,，不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴 
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱,。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋,，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求,。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,，以便 不時(shí)觀察,，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng),。
3.洗滌 
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵,。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板 
1.陰性對(duì)照顏色極淺,，在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色,。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度,、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法,。