詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,!
產(chǎn)品名稱:小鼠鼻黏膜上皮細(xì)胞
組織來源:鼻黏膜
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、EGF,、Hydrocortisone,、腎上腺素,、甲狀腺素、Insulin,、Transferrin,、Selenium Solution、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
小鼠鼻黏膜上皮體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀僀?
細(xì)胞簡介:
小鼠鼻黏膜上皮分離自鼻黏膜組織,;黏膜是覆蓋在機體內(nèi)消化,、呼吸,、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu),,由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成,。根據(jù)部位不同,有口腔黏膜,、胃腸黏膜,、鼻腔黏膜、氣管黏膜,、陰道黏膜,、眼瞼黏膜等不同名稱。它們的結(jié)構(gòu)也因功能,、部位不一而不盡相同,。鼻腔黏膜,簡稱鼻黏膜,,覆蓋于鼻腔表面,,黏膜下方為軟骨、骨或骨骼肌,。根據(jù)結(jié)構(gòu)與功能的不同,,鼻黏膜又分為前庭部、呼吸部和嗅部三部分,。前庭部是鄰近外鼻孔的部分,,有豐富的鼻毛可以阻擋空氣中較大的塵粒吸入。呼吸部占鼻黏膜的大部,,有發(fā)達的上皮纖毛,,它們可向咽部擺動,黏著有塵粒,、細(xì)菌的黏液排向咽部,,終將它們排出體外。此外,,此部分有豐富的血管與腺體,,對吸入的空氣有加溫和濕潤作用。嗅部黏膜范圍較小,,主要位于鼻腔頂部,。它含有一種專司嗅覺的嗅細(xì)胞及嗅腺,它們分泌能溶解到達嗅區(qū)的含氣味的微粒,,刺激嗅細(xì)胞表面上的嗅毛產(chǎn)生嗅覺,,而且還由于嗅細(xì)胞具有不同的受體,可分別接受不同化學(xué)分子的刺激,因此可產(chǎn)生不同的嗅覺,。
方法簡介:
實驗室分離的小鼠鼻黏膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,,并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的小鼠鼻黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一,、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),,培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
二,、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
a),、對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,,脫落后吸出,,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b),、對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄上清液,,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
收到細(xì)胞如何處理?
1,、首先,,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有,請拍照,,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。
4、靜置完成后,,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢、拍照,,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),;建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5,、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,,可正常傳代;若未超過80%,,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達80%左右再進行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松,。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時,若細(xì)胞密度超過80%,,可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),,補加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),,直至細(xì)胞密度達80%左右時再進行傳代操作
公司正在出售的產(chǎn)品:
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