詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
附睪 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X8495 |
細(xì)胞簡介:
小鼠附睪上皮分離自附睪組織;附睪(Epididymis)是一個由曲折,、細(xì)小的管子構(gòu)成的器官,一端接著輸精管(Ductusdeferens),,一端接著睪丸(Testis)的曲細(xì)精管,,具體結(jié)構(gòu)主要包括輸出小管和附睪管。附睪緊貼睪丸的上端和后緣,,可分為頭,、體、尾三部,。精子離開睪丸后通過輸出小管進(jìn)入附睪,。附睪具有暫存精液并分泌附睪液營養(yǎng)精子的功能,以促進(jìn)精子的進(jìn)一步成熟附睪的功能是暫存精子,,促進(jìn)精子的進(jìn)一步成熟,。精子在附睪內(nèi)獲得運動能力,總共停留8~17天,,終達(dá)到功能上的成熟,。在這個過程中,精子除了自身的因素,,還受到附睪微環(huán)境的影響,,這包括了一系列的物理、化學(xué)變化和精子形態(tài)的改變,??梢哉f,附睪微環(huán)境正常穩(wěn)定是附睪發(fā)揮促成熟這一功能的必要條件,。若附睪的功能發(fā)生異常,,精子則不能成熟,引起不育,。附睪上皮含有主細(xì)胞,、基細(xì)胞、亮細(xì)胞等幾種類型細(xì)胞,?;?xì)胞,其頂部離附睪管腔有一定距離,,在附睪各部分,,其形態(tài)沒有差別,一般認(rèn)為是貯備細(xì)胞,;另一種主細(xì)胞,,是維持附睪生理功能的物質(zhì)基礎(chǔ),在各區(qū)段的主細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)差別很大,,這也反映出各區(qū)段的生理功能的差異。除上皮細(xì)胞外,附睪的管壁組織結(jié)構(gòu)也有規(guī)律性的變化,,附睪管起始段平滑肌有自發(fā)地節(jié)律性收縮,,而尾部平滑肌就沒有這種特點,僅在射精一瞬間出現(xiàn)強(qiáng)烈的節(jié)律收縮,。作為負(fù)責(zé)提供適合精子成熟微環(huán)境的附睪,,具有活躍的分泌與吸收功能。其中,,附睪上皮的電解質(zhì)和水分的轉(zhuǎn)運,,對保持附睪內(nèi)合適的離子濃度和酸堿度,為精子成熟提供適宜的環(huán)境起著相當(dāng)重要的作用,。睪丸的支持細(xì)胞每天能產(chǎn)生大量睪網(wǎng)液,,如一只公羊每天約能分泌40毫升睪網(wǎng)液,而從附睪排出的只不過幾百微升,,也就是說睪丸分泌液有99%被附睪上皮重新吸收回體內(nèi),。動物實驗表明,結(jié)扎輸精管時睪丸不會腫脹,,但若結(jié)扎睪丸輸出小管,,睪丸第二天就會腫脹,這就充分證實了附睪存在著強(qiáng)有力的吸收功能,,但是重新吸收的意義尚不清楚,。體外培養(yǎng)附睪上皮細(xì)胞對精子的發(fā)育、成熟,,育,,附睪生理基礎(chǔ)功能研究具有重要意義。
方法簡介:
實驗室分離的小鼠附睪上皮采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的小鼠附睪上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、EGF、Hydrocortisone,、腎上腺素,、甲狀腺素,、Insulin、Transferrin,、Selenium Solution,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
小鼠附睪上皮體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)僀
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細(xì)胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞,;
2,、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行,。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
載脂蛋白E 英文名稱: apolipoprotein/apoprotein E 英文縮寫: APOE
載脂蛋白P 英文名稱: Apolipoprotein P 英文縮寫: ApoP
血管生成素相關(guān)生長因子 英文名稱: Angiopoietin Growth Factors 英文縮寫: AGF
血管生成素-2 英文名稱: Angiopoietin-2 英文縮寫: ANG2
NT5DC2蛋白抗體
GADD45G抗體
ASAH2重組小鼠 ASAH2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
Cholesterol 膽 100gCholesterol 膽
PAK3重組人 PAK3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
ACO1 Protein Human 重組人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
KIRREL Protein Mouse 重組小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
Cholesterol 膽 100gCholesterol 膽
ACO1 Protein Human 重組人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
ASAH2重組小鼠 ASAH2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
KIRREL Protein Mouse 重組小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
PAK3重組人 PAK3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
植物赤(GA)ELISA 試劑盒
Human ai cyclic ciullinated peptide aibody (CCP) ELISA Kit 人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)試劑盒
PorcineCompleme3,C3ELISAKit 豬補(bǔ)體蛋白3(C3)試劑盒分裝
ADVIgMVII腺病毒IgMⅦ型(間接法二步法)
血液(NO)活性熒光定量試劑盒50次
MouseSolubleprotein-100,S-100ELISAKit小鼠S100蛋白(S-100)試劑盒
小鼠附睪上皮細(xì)胞大鼠封閉蛋白3(CLDN3)試劑盒 ,,英文名: CLDN3 ELISA Kit
Rat beta endorphin (beta -EP) ELISA Kit 大鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)試劑盒
Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit 大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)試劑盒分裝
CLIAKitforDR-70TM(HumaumormarkerDR-70forlungcancer)ELISAKit人肺癌標(biāo)志物DR-70
細(xì)胞皮爾斯(PERLS-DAB)非血紅素鐵(三價)強(qiáng)化染色試劑盒
RatHighdensitylipoprotein,HDLELISAKit大鼠高密度脂蛋白(HDL)試劑盒