詳細(xì)介紹
核型多角體病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Nuclear Polyhedrosis Virus(NPV)PCR |
貨號(hào) | YS31186-R |
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),,能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽(yáng)性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無(wú)Ct值,,線形為直線或輕微斜線,,無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽(yáng)性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,。
(2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi),。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),,有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,,則判定為陽(yáng)性,否則為陰性,。
(3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值,。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板,;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),,通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈,;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品:
Cytochrome P450 2C8 + 2C9 + 2C19 + 2C12 antibody原裝,、分裝苯磺貝托司汀
Gata6 antibody原裝,、分裝葉綠素銅鈉鹽
CD74 antibody [PIN.1]原裝、分裝葉綠素銅鈉鹽
Glutathione Peroxidase 1 antibody原裝,、分裝葉綠素銅鈉鹽
CD74 antibody [CerCLIP.1]原裝,、分裝新綠原(標(biāo)準(zhǔn)品)
CaMKII antibody [6G9]原裝、分裝鹽伊伐布雷定
CaMKII antibody [6G9]原裝,、分裝鹽伊伐布雷定
HEY1 antibody原裝,、分裝鹽伊伐布雷定
Dishevelled 2 antibody原裝、分裝葉黃素; 二羥基-d-胡蘿卜素FLJ25006 antibody原裝,、分裝黃芪多糖(68%)
MYL7 antibody原裝,、分裝黃芪多糖(68%)
NDUFA3 antibody原裝、分裝黃芪多糖(68%)
Olig1 antibody原裝,、分裝黃芪多糖(50%)
Recombinant human TPA Tissue Plasminogen Activator protein原裝,、分裝黃芪多糖(50%)
Recombinant T. gondii Toxoplasma gondii p30 protein原裝、分裝黃芪多糖(50%)
PHF10 antibody原裝,、分裝黃芪多糖(30%)
L3MBTL3 antibody原裝,、分裝黃芪多糖(30%)
Recombinant p15 Treponema pallidum protein原裝、分裝黃芪多糖(30%)
核型多角體病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格PML Protein antibody [C7]原裝,、分裝4-氧基-13C,d3-雌激素
Native Human Serum Amyloid P/SAP protein原裝,、分裝4-氧基-[13C,2H3]-雌激素
Tuftelin 1 antibody原裝、分裝雌激素-2,4,16,16-d4 3-鈉鹽
ALDH1A2 antibody原裝,、分裝2-羥基雌激素
CPOX antibody原裝,、分裝雌激素 3-鉀鹽
GCM2 antibody原裝、分裝雌激素 3-酯
CD172 gamma antibody原裝,、分裝4-羥基雌激素
TBCC antibody原裝,、分裝Δ8,9-脫雌激素
NPEPPS antibody原裝、分裝雌激素 β-D-葡萄糖苷鈉鹽
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一,、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無(wú)到有,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油,。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三,、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行,。好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響,。一般而言,,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好,。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染,。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套,。