線頸*線蟲PCR檢測(cè)試劑盒原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍,，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

特異性強(qiáng)

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,；
②堿基配對(duì)原則,；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性,。

 

適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽(yáng)性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35,。
（2）陰性對(duì)照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線,，無指數(shù)增長(zhǎng)期,。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽(yáng)性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
（2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi),。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi),，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性,。
（3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無Ct值,。

PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火,；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈,；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短,；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈,。
實(shí)驗(yàn)過程：
一,、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無到有,，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA,，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三,、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行,。好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響,。一般而言,，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好,。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染,。操作過程中均應(yīng)戴手套。
下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

Trypsin antibody原裝,、分裝安倍生坦(標(biāo)準(zhǔn)品)

Legionella pneumophila antibody (FITC)原裝,、分裝鹽決奈達(dá)隆

Apolipoprotein A II/ApoA-II antibody (HRP)原裝,、分裝鹽決奈達(dá)隆

Helicobacter pylori antibody (FITC)原裝、分裝鹽決奈達(dá)隆

Influenza A Virus antibody原裝,、分裝決奈達(dá)隆(標(biāo)準(zhǔn)品)

E. coli O + E. coli K antibody (FITC)原裝,、分裝雷諾嗪

pan Endothelin antibody [3G10]原裝、分裝雷諾嗪

Listeria monocytogenes antibody (FITC)原裝,、分裝雷諾嗪

EBV Nuclear Antigen/EBNA1 antibody原裝,、分裝雷諾嗪(標(biāo)準(zhǔn)品)PRMT2/HMT1 antibody原裝、分裝鵝去氧膽

HOXB9 antibody原裝,、分裝鵝去氧膽

C5b-9 + C5b-8 antibody [aE11]原裝,、分裝鵝去氧膽

HOXC11 antibody原裝、分裝胰島素(牛)

SAP155 antibody原裝,、分裝胰島素(牛)

hnRNPLL antibody原裝,、分裝鈀碳催化

NFATC4 antibody原裝、分裝L-天門冬氨鉀

C4a antibody原裝,、分裝L-天門冬氨鉀

C4b antibody原裝,、分裝L-天門冬氨鉀
線頸*線蟲PCR檢測(cè)試劑盒Recombinant Human NTAL protein原裝、分裝依那普利-d5 叔基酯

Recombinant Human TTC11/FIS1 protein原裝,、分裝依那普利-d5馬來鹽

Recombinant Human TTC11/FIS1 protein原裝,、分裝依那普利

Recombinant Human TFIIB protein原裝、分裝依那普利

Recombinant Human TFIIB protein原裝,、分裝2,4-二(三基硅基)-5-氟尿嘧啶

Recombinant Human Frataxin protein原裝,、分裝氟脲苷-13C,15N2

Recombinant Human Frataxin protein原裝、分裝1,3-二芐基-5-氟尿嘧啶

Recombinant Human CRYZL1 protein原裝,、分裝5-氟二嘧啶-2,4-二-13C,15N2

Recombinant Human CRYZL1 protein原裝,、分裝1,3-二（芐氧基基)-5-氟尿嘧啶