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產(chǎn)品名稱：小鼠顱蓋造骨細胞
組織來源：顱骨
產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：梭形,、多角形
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
小鼠顱蓋造骨體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞簡介：
小鼠顱蓋造骨分離自顱骨組織；造骨細胞（osteoblast）亦稱成骨細胞,。是參與骨組織形成的細胞,。顱骨位于脊柱上方，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成,。除下頜骨及舌骨外,，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結(jié)，起著保護和支持腦,、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用,。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部,，內(nèi)有顱腔,，容納腦，共8塊,。面顱為顱的前下部分,，包含眶,、鼻腔、口腔等結(jié)構(gòu),，構(gòu)成面部的支架,，共15塊。成骨細胞是骨形成的主要功能細胞,，負責骨基質(zhì)的合成,、分泌和礦化。骨不斷地進行著重建,，骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區(qū)域,，分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì)，分泌蛋白酶消化骨基質(zhì),，形成骨吸收陷窩,；其后，成骨細胞移行至被吸收部位,，分泌骨基質(zhì),，骨基質(zhì)礦化而形成新骨；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵,。成骨細胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機制,、骨骼系統(tǒng)疾病的分子和細胞學(xué)基礎(chǔ)，也是藥物篩選,、生物材料開發(fā)和生物工程研究的重要手段,。
方法簡介：
實驗室分離的小鼠顱蓋造骨采用膠原酶消化法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的小鼠顱蓋造骨經(jīng)ALP染色檢測,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)步驟：
一,、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
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收到細胞如何處理,？
1、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,，請拍照,，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
3、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關(guān)信息,，如貼壁特性（貼壁/懸浮）,、細胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。
4,、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。
5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松,。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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