詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,!
產(chǎn)品名稱:小鼠卵泡顆粒細(xì)胞
組織來源:卵巢
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基,,含FBS,、EGF、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
小鼠卵泡顆粒體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠卵泡顆粒(卵巢顆粒細(xì)胞)分離自卵巢組織,;卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官,卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素,。卵巢的位置與睪丸相同,,僅左側(cè)發(fā)育(右側(cè)已退化),呈葡萄狀,,均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡,,卵泡呈黃色,卵巢表面密布血管,。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān),。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢,但是部分魚類的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu),,而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能,。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對(duì)卵圓形的生殖器官,它的外表有一層上皮組織,,其下方有薄層的結(jié)締組織,。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì),。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分,主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成,;髓質(zhì)位于中央,由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,,其中有許多血管,、淋巴管和神經(jīng)。卵巢顆粒細(xì)胞是卵巢的主要功能細(xì)胞,,其增殖與分化直接影響著卵泡的生長(zhǎng)啟動(dòng),、發(fā)育、排卵,、黃體形成以及甾體激素分泌等卵巢功能活動(dòng),。卵巢顆粒細(xì)胞是卵泡內(nèi)的大細(xì)胞群,也是主要的功能細(xì)胞,,卵泡發(fā)育的顯著標(biāo)志之一就是顆粒細(xì)胞迅速生長(zhǎng)及增殖,,而成年動(dòng)物的卵泡閉鎖主要是由顆粒細(xì)胞凋亡引起,尤其在卵泡發(fā)育后期,,此外,,顆粒細(xì)胞還與卵泡膜細(xì)胞共同完成卵巢激素的合成,維持著有利于卵母細(xì)胞生長(zhǎng)和成熟的微環(huán)境,。細(xì)胞形狀呈圓形或橢圓形,。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠卵泡顆粒采用先機(jī)械分離,而后膠原酶消化,,后差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠卵泡顆粒經(jīng)FSHR免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),,培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
二,、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
a),、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,,脫落后吸出,,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b),、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
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收到細(xì)胞如何處理,?
1、首先,,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,,請(qǐng)拍照,,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2,、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。
4、靜置完成后,,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢、拍照,,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),;建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照,、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%,,可正常傳代,;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),,直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松。
6,、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時(shí),,若細(xì)胞密度超過80%,,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml,;若細(xì)胞密度未超過80%,,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作