化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠心臟微血管周采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的小鼠心臟微血管周經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳1-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
原代細胞的培養(yǎng)條件：
一,、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性,；
2,、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L,；
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂??；
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應將原代細胞換液,；
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,；
2,、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,；
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進行分瓶試驗,；
4,、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子,，白血病細胞中要加入少量的原患者血清,，以利細胞生長；
5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行,。
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
心臟組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7644 |
細胞簡介：
小鼠心臟微血管周分離自心臟組織；心臟是脊椎動物身體中最重要的一個器官,，主要功能是為血液流動提供壓力,，把血液運行至身體各個部分。心臟由心肌構(gòu)成,，左心房,、左心室、右心房,、右心室四個腔組成,。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通,，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣）,，這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流,。心臟的作用是推動血液流動,，向器官,、組織提供充足的血流量，以供應氧和各種營養(yǎng)物質(zhì),，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機鹽,、尿素和尿酸等）,，使細胞維持正常的代謝和功能。心臟微血管內(nèi)皮細胞是組成心臟微血管腔面單層扁平上皮樣細胞,，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力,、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用,，在心臟血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義,。近年來大量研究表明，心肌微血管周細胞的功能和病理改變直接影響心肌細胞功能,，也是諸多毒素,、炎癥因子及病毒等重要靶位，其作為體外研究的細胞模型在心肌缺血-再灌注發(fā)病機制和細胞間旁分泌細胞生長因子研究中起著重要作用,。
細胞傳代及凍存：
| 細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
| 如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,，如白血病細胞,、淋巴細胞、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
血液DNA大量提取試劑盒 5T
BloodDNAMaxiKit 10T
血液RNA試劑盒 50T
BloodRNAKit 100T
小鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human ai reticulin aibody (ARA) ELISA Kit 人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)試劑盒
Humancaspaseactivateddeoxyribonuclease,CADELISAKit 人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforACA-IgG(Humanai-cardiolipinaibodyIgG)ELISAKit人抗心0脂抗體IgG
藥品乙酰舒泛(acesulfameK)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次
MouseOsteoprotegerin,OPGELISAKit小鼠骨保護素(OPG)試劑盒規(guī)格：96T/48T
APC標記人CD81單克隆抗體
卟膽原脫氨酶抗體
HA重組甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
P63 protein P63 抑制基因(抗原 0.5mgP63 protein P63 抑制基因(抗原)
CR2重組人 CD21 / CR2 / C3DR 蛋白 Protein
CBR3 Protein Human 重組人 CBR3 / HCBR3 / Carbonyl Reductase 3 蛋白
ACVRL1 Protein Human 重組人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (Fc 標簽)
P63 protein P63 抑制基因(抗原 0.5mgP63 protein P63 抑制基因(抗原)
CBR3 Protein Human 重組人 CBR3 / HCBR3 / Carbonyl Reductase 3 蛋白
HA重組甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
ACVRL1 Protein Human 重組人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (Fc 標簽)
CR2重組人 CD21 / CR2 / C3DR 蛋白 Protein
小鼠心臟微血管周細胞大鼠蛋白激酶C epsilon(PKCε)試劑盒 ,，英文名： PKCε ELISA Kit
Porcine von Willebrand factor / ristocetin cofactor (VWF) ELISA Kit 豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)試劑盒
病毒H9亞型核酸試劑盒(熒光PCR法) 48T
CLIAKitforLp-PL-A2(Humanlipoprotein-associatedphospholipaseA2)ELISAKit人脂蛋脂酶A2
通用細胞/組織載玻片制備試劑盒20次
ELISAKitPRL雞催乳素
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