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大鼠胃蛋白酶（PP）ELISA免費(fèi)代測(cè)試劑盒說明書
閱讀：526 發(fā)布時(shí)間：2024-3-21| 提 供 商 | 上海研生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 15.1KB |
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大鼠胃蛋白酶（PP）ELISA免費(fèi)代測(cè)試劑盒說明書
的優(yōu)勢(shì)：
1,、專業(yè)的elisa試劑盒生產(chǎn)企業(yè)(Elisa檢測(cè)試劑盒廠家)
2,、抗體----高效,、靈敏,、特異
3,、規(guī)范包被操作----吸附均勻,，吸附性好，空白值低,，孔底透明度高
4,、先進(jìn)的優(yōu)化方案----重復(fù)性高，可靠性強(qiáng)
5,、購買本公司的ELISA試劑盒,，免費(fèi)代檢測(cè)，北京地區(qū)免費(fèi)上門取樣
6,、技術(shù)服務(wù)要求：專業(yè),，規(guī)范，高效
7,、適用于血漿,、血清、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等多種類型的樣本
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到
100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,，在di一,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻；然后從di一孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為180 ng/L,，120 ng/L ,，60 ng/L，30 ng/,，15 ng/L）,。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘,。
注意事項(xiàng)
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
5. 底物請(qǐng)避光保存。
6. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
7. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
8. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
9.如需代測(cè)或者樣本暫時(shí)不測(cè)定，可立即低溫凍存,，溫度越低越好,，中間避免反復(fù)凍融，-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月,。
10.試劑使用須知：
11.（1）請(qǐng)參照相關(guān)法規(guī),、文獻(xiàn)、MSDS等信息,，理解并掌握好試劑的特性,，再進(jìn)行安全操作。
12.（2）通常購買試劑時(shí)一定要想到一次性用完,。若估算不足有剩余的話,，更加注意其他保管和管理。
13.（3）萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員,。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作,。對(duì)于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑,，應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理,。
14.（4）購買后，請(qǐng)務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng),；做好預(yù)防顛倒,，摔壞的措施和管理體制；在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng),，做好必要的安全對(duì)策,；對(duì)沒有標(biāo)明其危害特性、有害特性的,，也要慎重地進(jìn)行操作,；必須帶好防護(hù)用具,，小心翼翼進(jìn)行操作。