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OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞培養(yǎng)操作規(guī)程
閱讀:646 發(fā)布時間:2024-10-6OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,,貨號21875-091),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
基本共性:
1,、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜,,即細胞膜。
2,、所有的細胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA,。
3、作為遺傳信息復制與轉(zhuǎn)錄的載體,。
4,、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體,毫無例外地存在于一切細胞內(nèi),,核糖體,,是蛋白質(zhì)合成的機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用,。
5,、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。
6,、能進行自我增殖和遺傳
7,、新陳代謝
8、細胞都具有運動性,包括細胞自身的運動和細胞內(nèi)部的物質(zhì)運動