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PCR熒光定量檢測試劑盒使用方法:

一,、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對(duì)照,。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 7，6,，5,，4，3,，2,。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）,。

4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。

5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用,。

6. 換槍頭,，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用,。

注意事項(xiàng)：

1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,，若為長期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,，否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,，易產(chǎn)生沉淀,。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,，以溶解沉淀,，混勻后再使用。

3. 電泳檢測時(shí),，切勿使用含有SDS的Loading Buffer,。否則，電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi)，以便擴(kuò)增效率佳,。

5. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。