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胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒雙抗體夾心法(檢測未知抗原):

1,、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml,。在反應孔中加0.1ml,，4℃ 過夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔),。

3、加酶標抗體：于各反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml,。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌,。

4,、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘,。

5,、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“ "、“-"號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性,。

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