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土壤木質(zhì)素過氧化物酶(S-LiP)洗滌方法

閱讀:982          發(fā)布時間:2021-9-1

土壤木質(zhì)素過氧化物酶(S-LiP)洗滌方法:

1. 自動洗板機:每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次,。

實驗開始前,,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時,,均需充分混勻,,并盡量避免起泡。

1.加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,,加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。給酶標(biāo)板覆膜,,37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性,,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。

2.棄去液體,甩干,,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),,酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時,。

3.棄去孔內(nèi)液體,,甩干,洗板 3次,,每次浸泡1-2分鐘,,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干,。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,,加上覆膜,,37℃溫育1小時。

5.棄去孔內(nèi)液體,,甩干,洗板5次,,方法同步驟3,。

6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長,,但不可超過30分鐘,。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止),。

7.每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,,預(yù)熱儀器,,設(shè)置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束,。

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