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BY4741 感受態(tài)細(xì)胞操作方法（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,，置于冰浴中。
●  一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用,。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例,。
2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和）,，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘,。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,，該過程不要搖動(dòng)離心管,。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘）,，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),，使菌體復(fù)蘇,。
5 將離心管內(nèi)容物混勻,，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開,。將平板置于室溫直至液體被吸收,，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí),。
●  涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整,。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板,；反之,，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板,。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中,。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存,，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）