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技術(shù)文章

染料法熒光定量PCR試劑盒使用方法

閱讀:2207          發(fā)布時(shí)間:2021-5-31

染料法熒光定量PCR試劑盒使用方法:

一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,,分別為 7,,6,5,,4,,3,2,。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用。
5. 換槍頭,,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用,。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用。

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