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雞一氧化氮 ELISA試劑盒做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測時注意事項(xiàng)
閱讀:1118 發(fā)布時間:2020-11-26雞一氧化氮 ELISA試劑盒做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測時注意事項(xiàng):
1,、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的,,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事,,否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起,。
2,、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度,,并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗(yàn)樣品的濃度,即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),,包括上限和下限,。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度陡段,,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi),。
3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,,這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離,。
4、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時,,應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行,,以減少高濃度對低濃度的影響,,提高準(zhǔn)確性。
5,、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點(diǎn),,但至少要保證有5個點(diǎn)。
6,、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動,,但一般來說,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,,對于有些實(shí)驗(yàn),,至少要0.99甚至是0.999。
計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo)),,OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),,在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,,計(jì)算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度,。
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