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小鼠膠原酶I（Collagenase I）elisa免疫組化試劑盒檢測未知抗體的間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml,，4℃過夜,。
 
2.次日洗滌3次。
 
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌,。
 
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘。
 
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。

6. 結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號表示,。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上,，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性。