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大鼠脂聯(lián)素elisa檢測試劑盒雙抗體夾心法
閱讀：1480 發(fā)布時(shí)間：2020-7-22大鼠脂聯(lián)素elisa檢測試劑盒雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 過夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘。（簡稱洗滌,，下同）,。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌,。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）,。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌,。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號(hào)表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽性。