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常用的細(xì)胞破碎方法有哪些?

閱讀:11364      發(fā)布時(shí)間:2021-10-21
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細(xì)胞破碎是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁,,使細(xì)胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來(lái)的技術(shù),,是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)(產(chǎn)品)的基礎(chǔ)。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進(jìn)展,,以前認(rèn)為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn),。

但是由于細(xì)菌、酵母,、真菌,、植物細(xì)胞壁的組成成分不同,且同類細(xì)胞結(jié)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)也不同,,所以其細(xì)胞壁的堅(jiān)固程度不同。而動(dòng)物細(xì)胞雖沒有細(xì)胞壁,,但具有細(xì)胞膜,,也需要一定的細(xì)胞破碎方法來(lái)破膜,達(dá)到提取產(chǎn)物的目的,。

在目前的細(xì)胞破碎方法中常用的有:

1. 高剪切均質(zhì)乳化破碎細(xì)胞

方法:高剪切均質(zhì)機(jī)主要是由于了轉(zhuǎn)子高速運(yùn)轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的高速線速度,,還有頻率*的機(jī)械的效應(yīng),伴隨著強(qiáng)勁的動(dòng)能,,讓組織或細(xì)胞可以在定子,、轉(zhuǎn)子之間非常狹窄的空隙之中受到了非常的強(qiáng)烈的機(jī)械還有液力的剪切、液層的摩擦,、離心的擠壓,、撞擊的撕裂還有湍流等多種綜合性的效果,造成細(xì)胞破碎,。

說(shuō)明:均質(zhì)乳化機(jī)可用于 細(xì)胞破碎,、酵母細(xì)胞破碎(畢赤酵母,、釀酒酵母、漢遜酵母等),、大腸桿菌破碎,、結(jié)核桿菌破壁、絲狀真菌破碎,、人工倍體細(xì)胞破壁,、動(dòng)物細(xì)胞破碎、動(dòng)物組織細(xì)胞破碎,、Vero細(xì)胞破碎,、花粉破碎、植物細(xì)胞,、藻類破碎提取胞內(nèi)蛋白及核酸等動(dòng)物組織的細(xì)胞破碎,。


2. 組織搗碎機(jī)破碎細(xì)胞

方法:將材料配成稀糊狀液,放置于筒內(nèi)約 1/3體積,,蓋緊筒蓋,,將調(diào)速器先撥至最慢處,開動(dòng)開關(guān)后,, 逐步加速至所需速度,。

說(shuō)明:一般用于動(dòng)物組織、植物肉質(zhì)種子,、柔嫩的葉芽等,,轉(zhuǎn)速可高達(dá) 10000rpm以上。適合單次細(xì)胞破碎量在 50-1000mL之間,。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用,。

 

3. 超聲波破碎細(xì)胞

方法:用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂,,超聲對(duì)細(xì)胞的作用主要有熱效應(yīng),,空化效應(yīng)和機(jī)械效應(yīng)。

說(shuō)明:處理少量樣本,,操作簡(jiǎn)單,,重復(fù)性較好,節(jié)省時(shí)間,;多用于微生物和組織細(xì)胞的破碎,,如用大腸桿菌制備各種酶。因?yàn)槌暡óa(chǎn)生的化學(xué)自由基團(tuán)能使某些敏感性活性物質(zhì)變性失活,;大容量裝置聲能傳遞,,散熱均有困難,應(yīng)采取相應(yīng)降溫措施;對(duì)超聲波敏感和核酸應(yīng)慎用,。

 

4. 組織勻漿器破碎細(xì)胞

方法:先將剪碎的組織置于管中,,再套入研桿來(lái)回研磨,上下移動(dòng),,即可將細(xì)胞研碎,。勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。

說(shuō)明:此法細(xì)胞破碎程度高,,適用于量少和動(dòng)物臟器組織,。較易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌,較小的革蘭氏陽(yáng)性菌以及有些亞細(xì)胞器,,質(zhì)地堅(jiān)硬,,易損傷勻漿閥者,不適合用該法處理,。

 

5. 液氮研磨破碎細(xì)胞

方法:將液氮預(yù)凍的樣本放入研缽內(nèi)研磨

說(shuō)明:操作時(shí)所有接觸實(shí)驗(yàn)樣品的器具均需要使用液氮預(yù)冷,。因?yàn)槭堑蜏貤l件下操作,需要操作者做好防護(hù)措施,。

 

除了以上介紹的幾種常用細(xì)胞破碎方法之外,,還有磁珠法,反復(fù)凍融法,,酶溶法,,滲透壓法,高壓勻漿破碎等細(xì)胞破碎方法,。
 

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