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流式細(xì)胞儀的參數(shù)測量原理看完這些你就知道了
閱讀：1634 發(fā)布時(shí)間：2020-9-27
流式細(xì)胞儀(Flow cytometer )是對細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)分析和分選的裝置,。它可以快速測量,、存貯,、顯示懸浮在液體中的分散細(xì)胞的一系列重要的生物物理,、生物化學(xué)方面的特征參量，并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把的細(xì)胞亞群從中分選出來,。
多數(shù)流式細(xì)胞計(jì)是一種零分辨率的儀器,，它只能測量一個(gè)細(xì)胞的諸如總核酸量，總蛋白量等指標(biāo),，而不能鑒別和測出某一特定部位的核酸或蛋白的多少,。也就是說，它的細(xì)節(jié) 分辨率為零,。
下面讓我們一起來了解一下流式細(xì)胞儀的參數(shù)測量原理
流式細(xì)胞儀可同時(shí)進(jìn)行多參數(shù)測量,，信息主要來自特異性熒光信號及非熒光散射信號。測量是在測量區(qū)進(jìn)行的,，所謂測量區(qū)就是照射激光束和噴出噴孔的液流束垂直相交點(diǎn),。
液流中央的單個(gè)細(xì)胞通過測量區(qū)時(shí)，受到激光照射會向立體角為2π的整個(gè)空間散射光線,，散射光的波長和入射光的波長相同,。散射光的強(qiáng)度及其空間分布與細(xì)胞的大小、形態(tài),、質(zhì)膜和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān),，因?yàn)檫@些生物學(xué)參數(shù)又和細(xì)胞對光線的反射、折射等光學(xué)特性有關(guān),。
未遭受任何損壞的細(xì)胞對光線都具有特征性的散射,，因此可利用不同的散射光信號對不經(jīng)染色活細(xì)胞進(jìn)行分析和分選。
經(jīng)過固定的和染色處理的細(xì)胞由于光學(xué)性質(zhì)的改變,，其散射光信號當(dāng)然不同于活細(xì)胞,。散射光不僅與作為散射中心的細(xì)胞的參數(shù)相關(guān)，還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關(guān),。
在流式細(xì)胞術(shù)測量中,，常用的是兩種散射方向的散射光測量:
①前向角(即0角)散射(FSC);②側(cè)向散射(SSC),，又稱90角散射,。這時(shí)所說的角度指的是激光束照射方向與收集散射光信號的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。
一般說來,，前向角散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞的大小有關(guān),，對同種細(xì)胞群體隨著細(xì)胞截面積的增大而增大;對球形活細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明在小立體角范圍內(nèi)基本上和截面積大小成線性關(guān)系;
對于形狀復(fù)雜具有取向性的細(xì)胞則可能差異很大，尤其需要注意,。側(cè)向散射光的測量主要用來獲取有關(guān)細(xì)胞內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)的顆粒性質(zhì)的有關(guān)信息,。
側(cè)向散射光雖然也與細(xì)胞的形狀和大小有關(guān)，但它對細(xì)胞膜,、胞質(zhì),、核膜的折射率更為敏感，也能對細(xì)胞質(zhì)內(nèi)較大顆粒給出靈敏反映,。
在實(shí)際使用中,，儀器首先要對光散射信號進(jìn)行測量。當(dāng)光散射分析與熒光探針聯(lián)合使用時(shí),，可鑒別出樣品中被染色和未被染色細(xì)胞,。光散射測量有效的用途是從非均一的群體中鑒別出某些亞群。