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酶標(biāo)儀儀器介紹
酶標(biāo)儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器。大體可分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類,，兩大類的工作原理基本上都是一致的,，其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來(lái)分析抗原或抗體的含量,。 ELISA測(cè)定一般要求測(cè)試液的終體積在250u l以下，用一般光電比色計(jì)無(wú)法完成測(cè)試,，因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求,。
原理
酶標(biāo)儀的基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同，因此酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相的光電比色計(jì)或分光光度計(jì),。 光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,，進(jìn)入塑料微孔極中的待測(cè)標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上,，光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào).電信號(hào)經(jīng)前置放大,，對(duì)數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,，后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果. 微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板,，從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過程.微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測(cè)樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔,，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,，微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液.酶標(biāo)儀中所屬的光是電磁波，紫外光的波長(zhǎng)100nm～400nm,，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到,，大于780nm稱為紅外光。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下,，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值,。
檢測(cè)單位
光通過被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量,，特定波長(zhǎng)下,，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系,。檢測(cè)單位用OD值表示， OD是optical density（光密度）的縮寫,，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度,， OD=log（1/trans），其中trans為檢測(cè)物的透光值,。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：
E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度,， Ιo 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度,，Ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度。
OD值由下述公式計(jì)算：E=OD=a×b×c
c為檢測(cè)物的濃度 b為檢測(cè)物的厚度 a為摩爾因子在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng),，在此波長(zhǎng)下,，此物質(zhì)能夠吸收多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段,，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確,。因此，在測(cè)定檢測(cè)物時(shí),，我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè),，稱為測(cè)量波長(zhǎng)。但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收,，為了消除這種非特異性吸收,，我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng)，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性,。在參照波長(zhǎng)下,，檢測(cè)物光的吸收小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收,。