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【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

體外檢測小鼠血清中TNF-α的濃度，了解小鼠攻毒后對TNF-α的變化的影響

【實(shí)驗(yàn)原理】

將酶與試劑抗原用交聯(lián)劑結(jié)合起來，此種酶標(biāo)記抗原與抗本中相應(yīng)抗體發(fā)生特異反映，并牢固結(jié)合，在加入相應(yīng)的酶的底物時，底物被酶催化生成呈色產(chǎn)物，可根據(jù)呈色物的有無和呈色深淺作定性或定量觀察,。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗夾心Elisa法檢測樣本中小鼠TNF-α的濃度

【實(shí)驗(yàn)試劑和器材】

試劑：TNF-α定量分析酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

器材：4℃和-20℃冰箱、水浴鍋,、恒溫箱,、酶標(biāo)儀、電腦,、排槍,、移液槍、加樣槽,、渦旋振蕩器,、槍頭、96孔板

【實(shí)驗(yàn)步驟】

用去離子水將洗滌液稀釋到1倍（用到移液器）,；將不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品（100ul/孔）加入相應(yīng)空中（96孔板,、移液器），對于血清先加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul血清,，若稀釋量大,，就將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)充至100ul,，用封板膠紙封住反應(yīng)孔,，室溫孵育120min（漩渦振蕩器、恒溫箱）,；`用1倍洗滌液洗板5次,，且后一次至厚吸水紙上拍干；加入生物素化抗體工作液（100ul/孔）,。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,，室溫孵育60min；洗板5次,，且后一次至厚吸水紙上拍干（多孔道手動移液器）,；加入酶結(jié)合物工作液（100ul/孔）。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，避光室溫孵育20min,；洗板5次,，且后一次置厚吸水紙上拍干；加入顯色劑TMB100ul孔,，避光室溫孵育20min,，加入終止液50ul/孔，混勻后即可測量OD450值（電腦,、酶標(biāo)儀）

【注意事項(xiàng)】

1、ELISA實(shí)驗(yàn)是一個很*確的實(shí)驗(yàn)過程,，所以要*確稀釋和加樣

2,、恒溫箱中反應(yīng)時，要嚴(yán)格按照上面的時間,，不易過長

3,、也可用洗板機(jī)洗板5次

4、反映終止后要快速測OD值,，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性