細(xì)胞破碎機(jī)的冷凍研磨技術(shù)講解
閱讀:580 發(fā)布時(shí)間:2020-12-12
細(xì)胞破碎機(jī)即在樣品容器中放入研磨珠,,利用容器的高速自轉(zhuǎn)和震動,帶動研磨珠劇烈運(yùn)動,,對樣品進(jìn)行研磨粉碎,,從而達(dá)到破碎細(xì)胞壁,或者將固體顆粒處理為粉末的目的,。
細(xì)胞破碎有關(guān)冷凍研磨技術(shù)的說明:
細(xì)胞破碎分離提純某一種蛋白質(zhì)時(shí),,首先要把蛋白質(zhì)從組織或細(xì)胞中釋放出來并保持原來的天然狀態(tài),不喪失活性,。所以要采用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒔M織和細(xì)胞破碎。不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織,,其細(xì)胞破碎的難易不一,,使用的方法也不相同,如動物臟器的細(xì)胞膜較脆弱,,容易破碎,,植物和微生物由于具有較堅(jiān)固的纖維素、半纖維素組成的細(xì)胞壁,。幾乎所有細(xì)菌的細(xì)胞壁都是由肽聚糖組成,,它是難溶性的聚糖鏈,借助短肽交聯(lián)而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),,包圍在細(xì)胞周圍,,使細(xì)胞具有一定的形狀和強(qiáng)度。破碎細(xì)菌的主要阻力是來自于肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),其網(wǎng)結(jié)構(gòu)的致密程度和強(qiáng)度取決于聚糖鏈上所存在的肽鍵的數(shù)量和其交聯(lián)的程度,。
細(xì)胞放在低溫下冷凍(約-15℃℃),,然后在室溫中融化,反覆多次而達(dá)到破壁作用,。
細(xì)胞破碎冷凍研磨的原理由于冷凍,,一方面能使細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂,從而增加細(xì)胞的親水性能,,另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶,,形成冰晶粒,引起細(xì)胞膨脹而破裂,。對于細(xì)胞壁較脆弱的菌體,,可采用此法。