前一階段花費了不少時間,，來摸索體外BBB的構建方法，試了三種Transwell板,，試用了2-3臺細胞電阻儀，也換了不同課題組的細胞,，功夫不負有心人,，終于構建成功拿到了理想結果。 當初在摸索階段從小紅書上也獲得很多靈感,，也感激給予幫助不吝賜教的朋友們，因此借總結一些經(jīng)驗,，分享出來,，希望友友們少走彎路。
1,、細胞狀態(tài)很重要,！一定要等到細胞狀態(tài)良好時再種板,，上室小孔膜上鋪5W個細胞,，種板要均勻，上室100-200μL完培,，下室600-800μL完培,。
2、不要污染,！由于種Transwell板比較復雜,，工序多，要時刻注意消毒,。種完板后,，不用一直鏡下觀察；使用電阻儀檢測室,，更要注意不要污染。
3,、 選擇合適的Transwell板,，確定自己需要多少孔的孔板，從而知道種多少個細胞,。如果需要鏡下觀察細胞狀態(tài)的話,，要用PET膜（透明的）。我當初試了甄選/康寧/潔特的,，最后選了潔特的孔板,。
4、選擇穩(wěn)定好用的細胞電阻儀?。,。∵@個是重中之重,，比如密理博的電阻儀,，是筷子電極,，手持式的話容易抖,，導致數(shù)值不穩(wěn)。我選的是北京金工的RE1600上皮電壓電阻儀,，可以平穩(wěn)放在孔板上，檢測的時候數(shù)值超級穩(wěn)定,。
5,、關于BBB形成時間，每次構建BBB的時長都要根據(jù)細胞狀態(tài)而異,，要確保單層細胞形成（細胞電阻達到穩(wěn)定平臺期）,，再進行下一步實驗。
文章引用出處：體外血腦屏障模型構建-大功已成 - 小紅書 (xiaohongshu.com)
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