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有關(guān)超聲波細(xì)胞破碎的小知識(shí)
閱讀：1598 發(fā)布時(shí)間：2020-8-3
關(guān)于超聲波細(xì)胞破碎的內(nèi)容,。
細(xì)胞破碎是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來的技術(shù),，是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)（產(chǎn)品）的基礎(chǔ),。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進(jìn)展，以前認(rèn)為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn),。
但是由于細(xì)菌,、酵母、真菌,、植物細(xì)胞壁的組成成分不同,，且同類細(xì)胞結(jié)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)也不同，所以其細(xì)胞壁的堅(jiān)固程度不同,。而動(dòng)物細(xì)胞雖沒有細(xì)胞壁,，但具有細(xì)胞膜，也需要一定的細(xì)胞破碎方法來破膜,，達(dá)到提取產(chǎn)物的目的,。
細(xì)胞破碎方法：
1.機(jī)械法
1.1 組織搗碎
將材料配成稀糊狀液，放置于筒內(nèi)約1/3體積,，蓋緊筒蓋,，將調(diào)速器先撥至慢處，開動(dòng)開關(guān)后，逐步加速至所需速度,。一般用于動(dòng)物組織,、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等,，轉(zhuǎn)速可高達(dá)10000rpm/M以上,。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
1.2 勻漿器
先將剪碎的組織置于管中,，再套入研桿來回研磨,，上下移動(dòng)，即可將細(xì)胞研碎,。勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離,。制作勻漿器的材料，除玻璃外,，還可以用硬質(zhì)塑料,、不銹鋼、人造熒光樹脂等,。
此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高，適用于量少和動(dòng)物臟器組織,。
存在的問題：較易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌,，較小的革蘭氏陽性首以及有些亞細(xì)胞器，質(zhì)地堅(jiān)硬,，易損傷勻漿閥,，也不適合用該法處理。
1.3 研缽
多用于細(xì)菌或其他堅(jiān)硬植物材料,，研磨時(shí)常加入少量石英砂,，玻璃粉或其他研磨劑，以提高研磨效果,。
1.4 細(xì)菌磨
是一種改良了的研磨器,，比研缽具有更大的研磨面積，而且低部有出口,。操作時(shí)先把細(xì)菌和研磨粉調(diào)成糊狀,，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可將細(xì)菌細(xì)胞*磨碎,。
2.化學(xué)及生物化學(xué)法
2.1 自溶法
在一定PH和適當(dāng)?shù)臏囟认?，利用組織細(xì)胞內(nèi)自身的酶系統(tǒng)將細(xì)胞破碎的方法。此過程需較長時(shí)間,，常用少量防腐劑如甲苯等防止細(xì)胞的污染,。
2.2 酶溶法
利用各種水解酶，如溶菌酶、纖維素酶,、蝸牛酶,、半纖維素酶、脂酶等,，將細(xì)胞壁分解,，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來。有些細(xì)菌對(duì)溶菌酶不敏感,，加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后,，使之轉(zhuǎn)為對(duì)溶菌酶敏感而溶解。
2.3 化學(xué)滲透法
某些有機(jī)溶劑（如苯,、甲苯）,、抗生素、表面活性劑,、金屬螯合劑,、變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細(xì)胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)合物有選擇地滲透出來。其作用機(jī)理,；化學(xué)滲透取決于化學(xué)試劑的類型以及細(xì)胞壁和膜的結(jié)構(gòu)與組成,。
3.物理法
3.1 反復(fù)凍溶法
原理：因突然冷凍，細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成及胞內(nèi)外溶劑濃度的突然改變而破壞細(xì)胞,。
方法：將待破碎的細(xì)胞在-20度以下冰凍,，室溫融解，反復(fù)幾次,，由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹,，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。
3.3 急熱驟冷法
將材料投入沸水中,，維持85-90分鐘,，至水浴中急速冷卻，此法可用于細(xì)菌及病毒材料,。