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固相萃取儀基本操作四步走介紹
閱讀：939 發(fā)布時間：2021-6-15
固相萃取儀（SPE）是近年發(fā)展起來一種樣品預處理技術(shù),，由液固萃取和柱液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來,，主要用于樣品的分離、純化和濃縮,，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率,，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預處理過程,，操作簡單,、省時、省力,。廣泛用在醫(yī)藥,、食品、環(huán)境,、商檢,、化工等領(lǐng)域,。
固相萃取儀操作“四步走”規(guī)定：
1.活化
萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml溶劑沖洗濾膜使SPE填料保持濕潤，因為填料干燥會降低樣品保留值,，而各小柱的干燥程度不一,，也會影響回收率的重現(xiàn)性。先用甲醇等水溶性有機溶劑沖洗填料,，因為甲醇能潤濕吸附劑表面,，并滲透到非極性的硅膠鍵合相中，使硅膠更容易被水潤濕,；然后再加入水或緩沖液沖洗,，創(chuàng)造和樣品溶劑相容的環(huán)境并提高回收率。
2.上樣
?、儆?.1mol/L酸或堿調(diào)節(jié),，使pH=9，離心取上層液萃??；
②用甲醇,、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液,，以水或緩沖液稀釋后萃取,；
?、塾盟峄驘o機鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，調(diào)節(jié)pH值后萃??；
④超聲15min后加入水,、緩沖液，取上清液萃取,。流速應控制為1ml/min,，流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。
3.淋洗
反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液,，可在清洗液中加入少量有機溶劑,、無機鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個小柱的容積,，而SPE濾膜為5-10ml,。
4.洗脫
應選用5-10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度,，則可先將洗脫液揮干后,，再用流動相重組殘留物后進樣,。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水，可選用冷凍干燥法,。保留能力較弱的SPE填料可用小體積,、較弱的洗脫液洗下待測物，再用極性較強的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物,。
若待測物可電離,，可調(diào)節(jié)pH值，抑制樣品離子化,，以增強待測物在反相SPE填料中的保留,，洗脫時調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫，收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達到理想分離效果,。在洗脫過程中應減慢流速,，用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫，回收率更高,。